| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-62页 |
| ·微管 | 第13页 |
| ·微管的结构 | 第13-20页 |
| ·微管的动态不稳定性 | 第15-18页 |
| ·微管的调控 | 第18-20页 |
| ·微管结合蛋白 | 第20-43页 |
| ·微管结合蛋白概述和分类 | 第20-21页 |
| ·微管去稳定蛋白 | 第21-33页 |
| ·微管去稳定蛋白的分类 | 第21-23页 |
| ·微管去稳定蛋白去组装微管的分子机制 | 第23-30页 |
| ·微管解聚酶的功能及调控 | 第30-33页 |
| ·微管正端跟踪蛋白 | 第33-43页 |
| ·微管正端跟踪蛋白的概述和分类 | 第33-37页 |
| ·微管正端跟踪蛋白的定位机制 | 第37-39页 |
| ·微管正端跟踪蛋白的功能及调控 | 第39-43页 |
| ·微管结合蛋白的细胞学功能及调控 | 第43-61页 |
| ·微管结合蛋白调控细胞迁移 | 第43-48页 |
| ·细胞迁移概述 | 第43-45页 |
| ·微管结合蛋白在细胞迁移中的调控作用 | 第45-48页 |
| ·微管结合蛋白参与细胞有丝分裂 | 第48-60页 |
| ·细胞有丝分裂概述 | 第48-50页 |
| ·有丝分裂期的纺锤体微管 | 第50-52页 |
| ·有丝分裂期的动点-微管连接 | 第52-58页 |
| ·微管结合蛋白在细胞有丝分裂中的调控作用 | 第58-60页 |
| ·微管结合蛋白调控的其他细胞学功能 | 第60-61页 |
| ·小结和展望 | 第61-62页 |
| 第2章 材料与方法 | 第62-84页 |
| ·实验材料 | 第62-65页 |
| ·载体 | 第62页 |
| ·质粒 | 第62-63页 |
| ·细胞株 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63-65页 |
| ·蛋白质生化实验相关试剂 | 第63页 |
| ·细胞学实验相关试剂 | 第63-64页 |
| ·体外微管实验相关试剂 | 第64页 |
| ·抗体和siRNA | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-84页 |
| ·分子克隆 | 第65-68页 |
| ·氯化铷法制备感受态细胞 | 第65页 |
| ·DNA亚克隆的常规思路 | 第65-66页 |
| ·质粒的小量抽提 | 第66-67页 |
| ·质粒的Promega柱抽提 | 第67-68页 |
| ·原核系统中融合蛋白的表达和纯化 | 第68-69页 |
| ·原核系统中融合蛋白的表达 | 第68页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第68-69页 |
| ·His融合蛋白的纯化 | 第69页 |
| ·昆虫系统中融合蛋白的表达和纯化 | 第69-73页 |
| ·氯化钙法制备DH10Bac感受态细胞 | 第69页 |
| ·重组pFastBac质粒转化到DH10Bac E.coli | 第69-70页 |
| ·重组的Bacmid的提取 | 第70页 |
| ·重组的Bacmid的检测 | 第70-71页 |
| ·重组的Bacmid转染SF9细胞 | 第71-72页 |
| ·获得P1病毒株 | 第72页 |
| ·扩增病毒株 | 第72-73页 |
| ·在SF9细胞中大量表达融合蛋白 | 第73页 |
| ·纯化融合蛋白 | 第73页 |
| ·阳离子交换层析 | 第73页 |
| ·蛋白质-蛋白质相互作用分析 | 第73-75页 |
| ·Pull-down实验 | 第73-74页 |
| ·免疫沉淀实验 | 第74页 |
| ·分子筛层析 | 第74页 |
| ·免疫印迹实验 | 第74-75页 |
| ·体外磷酸化实验 | 第75页 |
| ·体外ATPase活性检测 | 第75-76页 |
| ·体外微管重建系统 | 第76-79页 |
| ·微管共沉淀实验 | 第76-77页 |
| ·体外跟踪动态生长的微管末端 | 第77-79页 |
| ·体外微管解聚实验 | 第79页 |
| ·电镜实验 | 第79页 |
| ·细胞学实验 | 第79-83页 |
| ·细胞培养 | 第79页 |
| ·细胞冻存和复苏 | 第79-80页 |
| ·磷酸钙法转染293T细胞 | 第80页 |
| ·脂质体法转染HeLa细胞 | 第80页 |
| ·电穿孔转染 | 第80-81页 |
| ·HeLa细胞同步化方法 | 第81页 |
| ·免疫荧光实验 | 第81-82页 |
| ·活细胞成像 | 第82页 |
| ·GFP-tubulin光激活实验 | 第82页 |
| ·细胞划痕修复实验 | 第82-83页 |
| ·单细胞迁移实验 | 第83页 |
| ·数据分析 | 第83-84页 |
| 第3章 实验结果 | 第84-144页 |
| ·微管正端跟踪蛋白DDA3调控微管动态性参与细胞迁移 | 第84-110页 |
| ·引言 | 第84页 |
| ·实验结果 | 第84-107页 |
| ·鉴定DDA3为一个新的微管正端跟踪蛋白 | 第84-87页 |
| ·DDA3微管正末端的定位和跟踪依赖于EB1 | 第87-94页 |
| ·SxLP/SxIP基序是DDA3跟踪微管正末端的结构基础 | 第94-98页 |
| ·DDA3调节细胞皮层附近的微管正端动态性 | 第98-104页 |
| ·DDA3参与细胞迁移 | 第104-107页 |
| ·小结与讨论 | 第107-110页 |
| ·微管解聚酶MCAK的磷酸化修饰调节微管动态性和染色体分离 | 第110-144页 |
| ·引言 | 第110-111页 |
| ·实验结果 | 第111-140页 |
| ·PLK1磷酸化MCAK | 第111-113页 |
| ·PLK1磷酸化MCAK Ser715促进其微管解聚活性 | 第113-119页 |
| ·Ser715磷酸化增强MCAK的ATP酶活力和微管结合活力 | 第119-123页 |
| ·Ser715磷酸化促进MCAK诱导微管崩塌 | 第123-126页 |
| ·MCAK Ser715磷酸化修饰发生在有丝分裂期 | 第126-130页 |
| ·MCAK Ser715磷酸化修饰调控有丝分裂期染色体分离 | 第130-134页 |
| ·MCAK Ser715磷酸化通过调节纺锤体微管动态性保证正确的动点-微管连接和染色体忠实分离 | 第134-140页 |
| ·小结与讨论 | 第140-144页 |
| 参考文献 | 第144-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第164页 |
