中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
前言 | 第9-11页 |
文献综述 | 第11-19页 |
第一章 羊口疮病毒重庆株(OrfV-CQ株)的分离与鉴定 | 第19-32页 |
1 材料 | 第19-20页 |
·病料来源 | 第19页 |
·传代细胞 | 第19页 |
·主要试剂 | 第19-20页 |
·主要仪器 | 第20页 |
2 方法 | 第20-24页 |
·羊口疮病毒的分离 | 第20-21页 |
·病料样本的制备 | 第20页 |
·MDBK细胞分离病毒 | 第20-21页 |
·羊口疮病毒的鉴定 | 第21-24页 |
·电镜观察 | 第21页 |
·间接免疫荧光 | 第21页 |
·PCR扩增与测序 | 第21-24页 |
·羊口疮病毒分离株TCID50测定 | 第24页 |
·动物感染试验 | 第24页 |
3 结果 | 第24-30页 |
·MDBK细胞分离病毒结果 | 第24-25页 |
·电镜观察结果 | 第25-26页 |
·间接免疫荧光结果 | 第26-27页 |
·PCR扩增结果 | 第27页 |
·PCR产物序列测定结果 | 第27-28页 |
·羊口疮病毒分离株TCID_(50)测定结果 | 第28-29页 |
·动物感染试验结果 | 第29-30页 |
4 讨论 | 第30-31页 |
5 小结 | 第31-32页 |
第二章 羊口疮病毒重庆株(OrfV-CQ株)F1L基因的生物信息学分析 | 第32-49页 |
1 材料 | 第32-33页 |
·病毒 | 第32页 |
·菌株与载体 | 第32页 |
·主要试剂 | 第32-33页 |
·主要仪器 | 第33页 |
2 方法 | 第33-39页 |
·OrfV-CQ株F1L基因克隆鉴定 | 第33-39页 |
·引物设计与合成 | 第33页 |
·OrfV-CQ株F1L基因PCR扩增 | 第33-34页 |
·OrfV-CQ株F1L基因重组质粒构建 | 第34-36页 |
·OrfV-CQ株F1L基因重组质粒鉴定 | 第36-39页 |
·OrfV-CQ株F1L基因生物信息学分析 | 第39页 |
3 结果 | 第39-46页 |
·OrfV-CQ株F1L基因PCR扩增结果 | 第39-40页 |
·OrfV-CQ株F1L基因重组质粒鉴定结果 | 第40-41页 |
·OrfV-CQ株F1L基因核苷酸及推导氨基酸序列同源性分析结果 | 第41-44页 |
·OrfV-CQ株F1L基因核苷酸测序及推导氨基酸序列结果 | 第41-42页 |
·OrfV-CQ株F1L基因核苷酸及氨基酸同源性分析结果 | 第42-44页 |
·OrfV-CQ株F1L基因遗传进化树分析结果 | 第44页 |
·OrfV-CQ株F1L基因生物信息学分析结果 | 第44-46页 |
·OrfV-CQ株F1L基因推导的氨基酸二级结构预测结果 | 第44-45页 |
·OrfV-CQ株F1L基因B细胞抗原表位综合分析结果 | 第45页 |
·OrfV-CQ株F1L基因编码蛋白信号肽预测结果 | 第45-46页 |
4 讨论 | 第46-48页 |
5 小结 | 第48-49页 |
第三章 羊口疮病毒重庆株 F1L 基因原核表达研究 | 第49-60页 |
1 材料 | 第49页 |
·毒株 | 第49页 |
·菌株与载体 | 第49页 |
·主要试剂 | 第49页 |
·主要仪器与设备 | 第49页 |
2 方法 | 第49-54页 |
·目的基因获取 | 第49-50页 |
·重组质粒构建 | 第50-52页 |
·重组质粒表达 | 第52-53页 |
·表达蛋白鉴定 | 第53-54页 |
3 结果 | 第54-58页 |
·重组质粒p ET-32a-F1L鉴定结果 | 第54-55页 |
·原核表达产物的SDS-PAGE分析结果 | 第55-57页 |
·诱导时间优化结果 | 第55页 |
·IPTG浓度优化结果 | 第55-56页 |
·SDS-PAGE鉴定结果 | 第56-57页 |
·Western blotting鉴定结果 | 第57-58页 |
4.讨论 | 第58-59页 |
5.小结 | 第59-60页 |
结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-66页 |
附录一 攻读硕士期间参与发表的论文 | 第66-67页 |
附录二 缩略词表 | 第67-68页 |
附录三 各种培养基、溶液及试剂配制 | 第68-70页 |
致谢 | 第70-71页 |