| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第12-13页 |
| 1. 前言 | 第13-23页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的起源 | 第13-14页 |
| ·PRRSV的病原学特征 | 第14-15页 |
| ·PRRS的防控现状 | 第15-17页 |
| ·根除策略 | 第15-16页 |
| ·母猪驯化策略 | 第16页 |
| ·PRRSV疫苗 | 第16-17页 |
| ·解旋酶作为潜在的抗病毒药物靶标 | 第17-19页 |
| ·PRRSV Nsp10的特性 | 第19-20页 |
| ·分子碎片药物设计理论及虚拟筛选 | 第20-23页 |
| 2. 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 3. 材料与方法 | 第24-45页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·毒株与细胞 | 第24页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·荧光底物的设计 | 第24-25页 |
| ·主要药品及试剂 | 第25页 |
| ·主要培养基及相关溶液 | 第25-26页 |
| ·缓冲液 | 第26-28页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）缓冲液 | 第26页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第26-27页 |
| ·解旋活性测定相关溶液的配制 | 第27页 |
| ·其他相关缓冲液及抗生素 | 第27-28页 |
| ·Western-blot缓冲液的配制 | 第28页 |
| ·化合物库 | 第28页 |
| ·晶体筛选试剂配制 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-45页 |
| ·Nsp10蛋白的原核表达及活性检测方法的建立 | 第28-40页 |
| ·目的基因的扩增 | 第28-29页 |
| ·Nsp10目的片段的回收 | 第29-30页 |
| ·目的片段的连接 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·质粒的少量提取与酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·表达质粒的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组菌的表达与鉴定 | 第32-36页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第36页 |
| ·解旋酶蛋白的ATPase活性测定 | 第36-37页 |
| ·解旋酶蛋白的解旋活性测定 | 第37-40页 |
| ·Nsp10关键活性位点的研究 | 第40页 |
| ·突变体蛋白原核表达质粒的构建及蛋白纯化 | 第40页 |
| ·突变体蛋白ATPase活性的检测分析 | 第40页 |
| ·突变体蛋白解旋活性的检测分析 | 第40页 |
| ·基于PRRSV Nsp10解旋活性的小分子抑制剂筛选 | 第40-43页 |
| ·基于解旋酶活性的抑制剂筛选方法的建立 | 第40页 |
| ·化合物碎片库的筛选 | 第40-41页 |
| ·基于细胞水平的解旋酶抑制剂的抗病毒活性研究 | 第41-43页 |
| ·蛋白结晶和数据收集 | 第43-45页 |
| ·利用凝胶过滤层析（分子筛）纯化蛋白质 | 第43页 |
| ·蛋白质结晶条件的筛选 | 第43页 |
| ·蛋白质结晶条件的优化 | 第43-44页 |
| ·衍射数据收集 | 第44-45页 |
| 4 实验结果与分析 | 第45-64页 |
| ·Nsp10蛋白的原核表达及纯化 | 第45-48页 |
| ·Nsp10基因的扩增 | 第45页 |
| ·重组原核表达质粒pET30a-Nsp10的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·Nsp10蛋白的原核表达、Western-blot鉴定及纯化条件的摸索 | 第46-48页 |
| ·Nsp10蛋白ATPase活性的研究 | 第48-50页 |
| ·Nsp10蛋白解旋活性的研究 | 第50-54页 |
| ·Nsp10蛋白关键活性位点的研究 | 第54-57页 |
| ·Nsp10小分子抑制剂的筛选 | 第57-62页 |
| ·方法建立 | 第57-58页 |
| ·高通量筛选 | 第58-61页 |
| ·细胞水平检测抑制剂抗病毒效果 | 第61-62页 |
| ·Nsp10蛋白结构的研究 | 第62-64页 |
| ·Nsp10蛋白结晶条件的筛选 | 第62页 |
| ·Nsp10蛋白结晶条件的优化 | 第62-63页 |
| ·衍射数据收集 | 第63-64页 |
| 5．讨论与结论 | 第64-68页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| ·Nsp10蛋白的基础研究 | 第64-65页 |
| ·Nsp10蛋白的保守序列研究 | 第65-66页 |
| ·以Nsp10蛋白为靶标开发抗PRRSV药物的基础研究 | 第66-67页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 在校期间发表的论文和所获得荣誉 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
