| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-17页 |
| ·L-缬氨酸的概述 | 第7-8页 |
| ·L-缬氨酸的性质 | 第7页 |
| ·L-缬氨酸的应用 | 第7页 |
| ·L-缬氨酸的工业生产 | 第7-8页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌发酵生产 L-缬氨酸的概述 | 第8-14页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌简介 | 第8页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌生物合成 L-缬氨酸的途径和调控机制 | 第8-11页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌发酵生产 L-缬氨酸的代谢改造策略 | 第11-12页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌 L-缬氨酸生产菌株的选育情况 | 第12-14页 |
| ·Lrp 的概述 | 第14-16页 |
| ·Lrp 简介 | 第14页 |
| ·Lrp 在大肠杆菌中的调控 | 第14-15页 |
| ·Lrp 在谷氨酸棒状杆菌中的研究现状 | 第15-16页 |
| ·本课题立题依据和意义 | 第16页 |
| ·本课题主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料和方法 | 第17-30页 |
| ·实验材料 | 第17-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第17-18页 |
| ·主要引物 | 第18-20页 |
| ·培养基和条件 | 第20页 |
| ·工具酶和试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·分子实验操作 | 第21-23页 |
| ·表达质粒和菌株的构建 | 第23-25页 |
| ·基因敲除菌株的构建 | 第25-27页 |
| ·最小抑菌浓度和酶活测定 | 第27页 |
| ·菌体培养和发酵 | 第27-28页 |
| ·发酵参数测定 | 第28-29页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析 | 第29-30页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第30-50页 |
| ·Lrp 对谷氨酸棒状杆菌 L-缬氨酸代谢的调控 | 第30-36页 |
| ·表达 Lrp 能提高 L-缬氨酸产量但抑制菌体生长 | 第30-32页 |
| ·表达 Lrp 能提高 L-缬氨酸代谢相关基因的转录水平 | 第32-33页 |
| ·突变 Lrp1 和 LF1 能提高 L-缬氨酸产量并减弱生长抑制 | 第33页 |
| ·启动子检测质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·氯霉素 MIC 和 Cat 酶活分析证实突变影响转录 | 第34-36页 |
| ·VWB-1 发酵 L-缬氨酸的代谢改造 | 第36-41页 |
| ·敲除基因 pgi 效果不明显 | 第36-37页 |
| ·敲除基因 brnQ 效果不明显 | 第37-38页 |
| ·敲除基因 ldh 和厌氧发酵能显著提高 VWB-1 的 L-缬氨酸产量 | 第38-40页 |
| ·共同表达 Lrp1 和 BrnFE 能显著提高 VWB-1 的 L-缬氨酸产量 | 第40-41页 |
| ·ATCC13869 高产菌株的系统构建 | 第41-46页 |
| ·共同表达 Lrp1 和 BrnFE 能显著提高 ATCC13869 的 L-缬氨酸产量 | 第42-43页 |
| ·表达 Lrp 和基因 alaT 敲除对 L-丙氨酸代谢相关基因转录有影响 | 第43-44页 |
| ·三敲菌株 WCC003 能提高 L-缬氨酸产量并减少副产物 | 第44-45页 |
| ·串联表达 ilvBNC1、Lrp1 和 BrnFE 能进一步提高 L-缬氨酸产量 | 第45-46页 |
| ·WCC003/pJYW-4-ilvBNC1-lrp1-brnFE 发酵优化 | 第46-50页 |
| ·初始 L-异亮氨酸添加量的优化 | 第47页 |
| ·醋酸钾补加策略的优化 | 第47页 |
| ·丙酮酸钠添加量的优化 | 第47页 |
| ·接种方法的优化 | 第47-48页 |
| ·最终罐上发酵 | 第48-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
