| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-17页 |
| 1 草鱼呼肠孤病毒 | 第10-11页 |
| 2 病毒基因编码蛋白和功能研究 | 第11-12页 |
| 3 RNA 干扰介导的基因沉默 | 第12-14页 |
| 4 Dicer 酶的研究进展 | 第14-15页 |
| ·Dicer 的结构和种类 | 第14-15页 |
| ·Dicer 结构域的功能 | 第15页 |
| ·Dicer 的功能 | 第15页 |
| 5 本文研究的目的及意义 | 第15-17页 |
| 第一章 草鱼 Dicer 基因的克隆和病毒感染条件下的表达研究 | 第17-42页 |
| 1. 材料和方法 | 第17-30页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·主要仪器与设备 | 第17-18页 |
| ·药品与试剂 | 第18页 |
| ·所用软件 | 第18-19页 |
| ·试验方法 | 第19-30页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第19页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第19-20页 |
| ·PCR | 第20页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物的连接反应和转化反应 | 第21页 |
| ·质粒提取 | 第21-22页 |
| ·cDNA 末端快速扩增技术 RACE | 第22-24页 |
| ·qRT-PCR | 第24页 |
| ·CIK 细胞的传代培养 | 第24-25页 |
| ·GCRV 的增殖 | 第25页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第25页 |
| ·CiDicer 全长的克隆 | 第25-26页 |
| ·序列分析和系统进化分析 | 第26页 |
| ·CiDicer 基因表达的测定 | 第26-28页 |
| ·草鱼 CiDicer 蛋白的原核表达 | 第28页 |
| ·草鱼 Dicer 融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第28页 |
| ·CiDicer 抗血清的制备及纯化 | 第28页 |
| ·鉴定纯化后的多克隆抗体 | 第28-30页 |
| 2. 结果与分析 | 第30-40页 |
| ·草鱼 CiDicer 基因克隆和结构分析 | 第30-37页 |
| ·草鱼 CiDicer 的蛋白表达 | 第37-40页 |
| 3. 讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 草鱼呼肠孤病毒 NS31 蛋白拮抗宿主 RNA 干扰 | 第42-54页 |
| 1 材料和方法 | 第42-48页 |
| ·仪器与设备 | 第42页 |
| ·材料与试剂 | 第42页 |
| ·所用软件 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-48页 |
| ·病毒基因组（dsRNA）的提取 | 第42-43页 |
| ·病毒全基因组 cDNA 的合成 | 第43页 |
| ·病毒基因编码序列的扩增 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的构建 | 第44页 |
| ·质粒提取 | 第44-45页 |
| ·重组质粒转染 | 第45页 |
| ·真核表达的验证 | 第45页 |
| ·亚细胞定位 | 第45-46页 |
| ·GFP shRNA 质粒构建 | 第46页 |
| ·酶切和连接反应 | 第46页 |
| ·重组质粒的转化、筛选、鉴定和质粒提取 | 第46-47页 |
| ·共转染 | 第47页 |
| ·定量 RT-PCR 检测 GFP shRNA 表达质粒对 GFPmRNA 的影响 | 第47页 |
| ·GCRV 感染过表达 NS31 的 CIK 细胞 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-52页 |
| ·病毒重组蛋白的细胞定位 | 第48-49页 |
| ·病毒重组蛋白的表达 | 第49页 |
| ·共转染细胞中 GFP shRNA 对 GFP mRNA 表达的影响 | 第49-52页 |
| ·过表达 NS31 的 CIK 细胞对病毒感染的影响 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 附录：论文发表情况 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
