| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 抑制自噬增加癌对化疗药物的敏感性综述 | 第11-37页 |
| 第1节 癌症的危害和诱发因素 | 第11-13页 |
| 第2节 癌症的治疗方法概述 | 第13-17页 |
| ·治疗癌症的方法简介 | 第13页 |
| ·肿瘤的化疗 | 第13-17页 |
| ·化疗概述 | 第13-14页 |
| ·顺铂抗癌机制 | 第14-15页 |
| ·紫杉醇抗癌机制 | 第15-16页 |
| ·化疗的副作用 | 第16-17页 |
| 第3节 癌的耐药性 | 第17-19页 |
| ·癌对化疗药物的耐受 | 第17-18页 |
| ·癌的多耐药性 | 第18-19页 |
| 第4节 癌细胞自噬与耐药 | 第19-27页 |
| ·自噬概述 | 第19-20页 |
| ·自噬可致癌细胞耐药 | 第20页 |
| ·癌细胞自噬的调控 | 第20-24页 |
| ·MicroRNA在自噬调控中的作用 | 第24-27页 |
| ·MicroRNA概述 | 第24-25页 |
| ·microRNAs对自噬的调控 | 第25-27页 |
| 第5节 抑制自噬的方法 | 第27-30页 |
| ·采用化学试剂抑制自噬 | 第27页 |
| ·采用基因干扰和miRNAs调节自噬 | 第27-30页 |
| ·以脂质体转染miRNAs | 第28页 |
| ·采用PEI粘附miRNAs,让细胞内吞转染miRNAs | 第28页 |
| ·构建含miRNAs的慢病毒转染细胞与动物 | 第28-30页 |
| 参考文献 | 第30-37页 |
| 第二章 用miR-30a抑制自噬提高癌细胞对顺铂的敏感性 | 第37-54页 |
| 第1节 前言 | 第37-39页 |
| 第2节 材料与方法 | 第39-45页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39-40页 |
| ·试验方法 | 第40-45页 |
| ·细胞培养 | 第40页 |
| ·细胞处理 | 第40页 |
| ·蛋白质提取与自噬相关蛋白Western blotting标记 | 第40-41页 |
| ·细胞免疫荧光标记 | 第41页 |
| ·RNA提取 | 第41页 |
| ·q-rtPCR检测miRNAs含量 | 第41-42页 |
| ·流式细胞仪测细胞凋亡 | 第42-43页 |
| ·microRNA-30a过表达慢病毒载体构建与包装 | 第43-44页 |
| ·设计miR-30a shRNA序列 | 第43-44页 |
| ·表达miR-30a shRNA重组慢病毒载体的构建与包装,转染 | 第44页 |
| ·动物实验 | 第44-45页 |
| 第3节 实验结果 | 第45-51页 |
| ·与自噬有关的microRNAs变化 | 第45页 |
| ·顺铂可诱发癌细胞自噬 | 第45-46页 |
| ·过表达miR-30a可抑制顺铂诱导的自噬,提高癌细胞凋亡率 | 第46-47页 |
| ·miR-30a提高癌细胞对顺铂的敏感性 | 第47-49页 |
| ·用慢病毒转染细胞 | 第49页 |
| ·对荷瘤动物转染miR-30a慢病毒促进顺铂消除肿瘤 | 第49-51页 |
| 第4节 讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第三章 抑制自噬消除癌细胞的多耐药性 | 第54-70页 |
| 第1节 前言 | 第54-56页 |
| 第2节 材料与方法 | 第56-61页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·实验仪器 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·用紫杉醇,顺铂以及二者混合试剂处理多耐药癌细胞 | 第57页 |
| ·细胞凋亡测试 | 第57页 |
| ·用免疫荧光标记自噬泡 | 第57页 |
| ·用免疫荧光标记细胞微管 | 第57-58页 |
| ·用miR-30a和3-MA处理细胞 | 第58页 |
| ·自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的Western Blotting标记 | 第58页 |
| ·Beclin-1复合物白免疫共沉淀 | 第58-59页 |
| ·miRNA含量测定 | 第59-60页 |
| ·细胞周期测定 | 第60-61页 |
| 第3节 实验结果 | 第61-66页 |
| ·SGC-7091耐受紫杉醇和顺铂 | 第61页 |
| ·顺铂和紫杉醇可诱发耐药细胞自噬 | 第61-64页 |
| ·抑制自噬可缓解癌细胞多耐药性,促进凋亡 | 第64-66页 |
| 第4节 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 第四章 提取牛初乳miR-30a抑制癌细胞自噬促进化疗 | 第70-90页 |
| 第1节 前言 | 第70-72页 |
| 第2节 方法与材料 | 第72-79页 |
| ·试剂与材料 | 第72页 |
| ·实验仪器 | 第72-73页 |
| ·试验方法 | 第73-75页 |
| ·牛奶样品制备与RNA提取 | 第73页 |
| ·电镜观察牛初乳110000×g离心沉淀中的微囊泡 | 第73-74页 |
| ·细胞实验 | 第74-75页 |
| ·牛乳miR-30a,合成的miR-30a,3-MA处理顺铂化疗癌细胞 | 第74-75页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第75页 |
| ·细胞自噬泡免疫荧光标记 | 第75页 |
| ·用牛初乳组分处理化疗的荷瘤小鼠 | 第75-76页 |
| ·q-rtPCR测miRNA含量 | 第76-77页 |
| ·Western Blotting定量标记自噬相关蛋白Beclin-1和LC3 | 第77页 |
| ·免疫组化标记肿瘤组织中的Beclin-1 | 第77-78页 |
| ·统计分析 | 第78-79页 |
| 第3节 实验结果 | 第79-86页 |
| ·牛初乳内含有丰富的miR-30a | 第79-80页 |
| ·牛初乳miR-30a,合成的miR-30a和3-MA抑制顺铂诱导癌细胞自噬 | 第80-82页 |
| ·用富含miR-30a的牛初乳组分抑制自噬可促进癌细胞化疗 | 第82-83页 |
| ·富含miR-30a的牛初乳组分可促进顺铂对肿瘤化疗 | 第83-86页 |
| 第4节 讨论 | 第86-88页 |
| ·引入牛初奶miR-30a,可抑制自噬,增进化疗的癌细胞和肿瘤消亡 | 第86-87页 |
| ·牛初乳辅助抗癌应用开发前景 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-90页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第90-97页 |
| 第1节 顺铂和紫杉醇的抗癌机制 | 第90-91页 |
| 第2节 化疗与耐药性 | 第91-92页 |
| 第3节 自噬是造成肿瘤耐药的一个原因 | 第92-93页 |
| 第4节 抑制自噬可增加肿瘤对药物的敏感性,缓解耐药,促进抗癌效率 | 第93-94页 |
| 第5节 开发牛初乳miR-30a用于辅助治疗癌症 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 博士在读期间发表的论文 | 第97-98页 |
| 技术发明与专利 | 第98页 |
| 所获荣誉 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
