| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 第一章 H5N1亚型禽流感病毒研究进展 | 第12-26页 |
| ·A型流感病毒分子生物学概述 | 第12-16页 |
| ·H5N1亚型禽流感病毒在人群中的传播 | 第16-17页 |
| ·H5N1亚型禽流感病毒的传播途径与致病性 | 第17-19页 |
| ·流感疫苗和抗病毒药物 | 第19-26页 |
| 第二章 抗病毒信号通路研究进展 | 第26-36页 |
| ·Ⅰ型干扰素(type Ⅰ IFNs)基因转录调控 | 第27-28页 |
| ·抗病毒先天免疫的TLR信号通路 | 第28-30页 |
| ·抗病毒先天免疫的RIG-Ⅰ信号通路 | 第30-31页 |
| ·RIG-Ⅰ通路中的VISA信号分子 | 第31-34页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 第三章 H5N1亚型禽流感病毒NP的原核表达纯化及抗NP多克隆抗体制备 | 第36-46页 |
| ·材料与方法 | 第36-41页 |
| ·毒株、细胞和质粒 | 第36-37页 |
| ·工具酶 | 第37页 |
| ·抗体、试剂和试剂盒 | 第37页 |
| ·主要使用仪器 | 第37页 |
| ·实验动物 | 第37-38页 |
| ·病毒增殖及效价测定 | 第38页 |
| ·重组质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·Western Blot检测 | 第40页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| ·抗体效价测定及其特异性分析 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-44页 |
| ·重组质粒pET-△NP的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| ·NP蛋白的表达与纯化 | 第42-44页 |
| ·多克隆抗体的滴度与特异性 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 融合的异源信号肽tPA对NP蛋白表达及DNA疫苗效力影响的研究 | 第46-63页 |
| ·材料与方法 | 第47-52页 |
| ·小鼠和毒株 | 第47页 |
| ·多肽合成 | 第47-48页 |
| ·DNA质粒的构建及大量制备 | 第48-49页 |
| ·NP蛋白体外表达Western Blot检测 | 第49-50页 |
| ·NP蛋白定位的免疫荧光检测 | 第50页 |
| ·小鼠免疫与攻毒 | 第50页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第50-51页 |
| ·小鼠脾脏细胞分离 | 第51-52页 |
| ·ELISPOT分析IFN-γ的表达 | 第52页 |
| ·胞内细胞因子流式分析(ICCS) | 第52页 |
| ·结果 | 第52-60页 |
| ·融合的异源信号肽tPA对NP蛋白的表达和亚细胞定位的影响 | 第52-54页 |
| ·融合tPA能够增强NP DNA疫苗诱导小鼠的体液免疫应答 | 第54-55页 |
| ·融合tPA能够增强NP DNA疫苗诱导小鼠的细胞免疫应答 | 第55-58页 |
| ·融合tPA能够增强NP DNA疫苗诱导小鼠针对同源和异源毒株感染的免疫保护 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| 第五章 VISA作为DNA疫苗分子佐剂效应的研究 | 第63-83页 |
| ·试验材料与方法 | 第66-71页 |
| ·小鼠和毒株 | 第66页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第66页 |
| ·质粒构建及其大量制备 | 第66-67页 |
| ·Luciferase assay检测TRIF、VISA激活细胞因子表达活性 | 第67-68页 |
| ·动物免疫 | 第68-69页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第69页 |
| ·血凝抑制试验(HI assay) | 第69页 |
| ·ELISPOT分析IFN-γ的表达 | 第69-70页 |
| ·胞内细胞因子流式分析(ICCS) | 第70-71页 |
| ·小鼠攻毒试验 | 第71页 |
| ·试验结果 | 第71-80页 |
| ·细胞信号分子TRIF和VISA过表达可有效激活IFN-β和NK-κB启动子活性 | 第71-73页 |
| ·TRIF和VISA不影响小鼠特异性体液免疫应答 | 第73-75页 |
| ·TRIF和VISA能有效增强小鼠特异性细胞免疫应答 | 第75-77页 |
| ·TRIF和VISA能显著提高小鼠针对同源和异源H5N1禽流感毒株感染的免疫保护 | 第77-80页 |
| ·讨论 | 第80-83页 |
| 研究总结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-104页 |
| 博士在读期间发表和待发表论文 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
