| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 主要符号表 | 第12-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-38页 |
| ·脂肪酶 | 第18-22页 |
| ·脂肪酶结构特征 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶的“界面激活”现象 | 第19-20页 |
| ·脂肪酶的催化机制 | 第20-22页 |
| ·偏甘油酯脂肪酶 | 第22-26页 |
| ·偏甘油酯脂肪酶重要的生理功能 | 第22-24页 |
| ·偏甘油酯脂肪酶极具工业应用价值 | 第24-26页 |
| ·蛋白质晶体学 | 第26-30页 |
| ·蛋白质结晶的基础理论 | 第26-27页 |
| ·影响蛋白质结晶的因素 | 第27-28页 |
| ·蛋白质晶体解析的一般步骤 | 第28-30页 |
| ·蛋白质模拟理论 | 第30-34页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第31-32页 |
| ·分子动力学模拟 | 第32-34页 |
| ·马拉色菌单酯和二酯脂肪酶 | 第34-35页 |
| ·马拉色菌 | 第34-35页 |
| ·球形马拉色菌单酯和二酯脂肪酶 | 第35页 |
| ·研究发现，研究背景，意义和研究内容 | 第35-38页 |
| ·研究背景 | 第35-36页 |
| ·研究内容 | 第36-38页 |
| 第二章 球形马拉色菌脂肪酶基因的克隆和表达 | 第38-52页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·材料与仪器 | 第38-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第38-39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·缓冲液、培养基 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-47页 |
| ·脂肪酶 SMG1 基因序列的分析及其引物设计 | 第40-42页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第42-43页 |
| ·构建 BSK-smg1 质粒 | 第43页 |
| ·SKB-smg1 重组质粒转化到大肠杆菌 DH5α | 第43-44页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| ·构建毕赤酵母表达载体 pGAPZαA-smg1 | 第45-46页 |
| ·SMG1 毕赤酵母重组菌株构建和筛选 | 第46-47页 |
| ·SMG1 酶活的测定 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-51页 |
| ·球形马拉色菌单酯和二酯脂肪酶序列分析 | 第47-49页 |
| ·smg1 基因序列合成 | 第49页 |
| ·组成型重组脂肪酶 SMG1 毕赤酵母菌株的构建 | 第49-50页 |
| ·毕赤酵母重组表达菌株的筛选 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第三章 马拉色菌脂肪酶 SMG1 的纯化和酶学特性研究 | 第52-68页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料与仪器 | 第52-53页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52页 |
| ·缓冲液 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-57页 |
| ·粗酶液制备 | 第53页 |
| ·粗酶液浓缩处理 | 第53页 |
| ·阴离子交换层析 | 第53-54页 |
| ·对硝基苯酚法测定脂肪酶酶活 | 第54页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的最适催化温度和温度稳定性 | 第54页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的最适催化 pH 和 pH 稳定性 | 第54-55页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的底物特异性 | 第55页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的有机溶剂耐受性 | 第55页 |
| ·金属离子对于单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的影响 | 第55页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 对于甘油二酯位置偏好性 | 第55页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的界面催化特性 | 第55-56页 |
| ·不同表面活性剂对于单酯和二酯脂肪酶 SMG1 酶活的影响 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-66页 |
| ·重组脂肪酶 SMG1 的纯化 | 第57页 |
| ·脂肪酶 SMG1 的最适催化温度和温度耐受性 | 第57-58页 |
| ·脂肪酶 SMG1 的最适催化 pH 和 pH 稳定性 | 第58-59页 |
| ·脂肪酶 SMG1 的底物特异性 | 第59-60页 |
| ·脂肪酶 SMG1 对于甘油酯底物的位置选择性 | 第60-61页 |
| ·有机溶剂对于脂肪酶 SMG1 催化活性的影响 | 第61页 |
| ·金属离子对于脂肪酶 SMG1 酶活的影响 | 第61-62页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的界面催化表现 | 第62-64页 |
| ·表面活性剂对于单酯和二酯脂肪酶 SMG1 酶活的影响 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-68页 |
| 第四章 马拉色菌脂肪酶 SMG1 的晶体学研究 | 第68-83页 |
| ·引言 | 第68页 |
| ·试剂与仪器 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-71页 |
| ·脂肪酶 SMG1 分子排阻层析纯化 | 第69页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第69页 |
| ·筛选结晶的蛋白质浓度 | 第69-70页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 结晶条件筛选和优化 | 第70页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 衍射数据的收集和处理 | 第70-71页 |
| ·结果和讨论 | 第71-81页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的凝胶排阻层析纯化 | 第71-72页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 结晶条件的筛选 | 第72页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 晶体结构 | 第72-74页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的结构 | 第74-75页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的催化三联体和“氧负离子洞” | 第75-76页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 独特的“盖子”结构 | 第76-81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 第五章 单酯和二酯脂肪酶 SMG1 底物选择性的结构基础 | 第83-94页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·实验方法 | 第83-85页 |
| ·构建单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的开放结构 | 第83-84页 |
| ·构建单酯和二酯脂肪酶 SMG1 与底物类似物的复合物结构 | 第84-85页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的分子动力学模拟 | 第85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-92页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1 的开放结构 | 第85-87页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶 SMG1-底物类似物复合结构 | 第87-88页 |
| ·影响单酯和二酯脂肪酶 SMG1 底物选择性的关键氨基酸 | 第88-90页 |
| ·单酯和二酯脂肪酶中保守的序列模式 | 第90-92页 |
| ·小结 | 第92-94页 |
| 结论与展望 | 第94-97页 |
| 结论 | 第94-95页 |
| 本研究的创新点 | 第95页 |
| 未来工作展望 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-112页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第112-113页 |
| 参与的主要研究课题 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 附件 | 第115页 |
