| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-24页 |
| ·转基因作物研究现状 | 第14页 |
| ·转基因甘蔗研究现状 | 第14-17页 |
| ·甘蔗遗传转化技术 | 第15-16页 |
| ·转基因甘蔗研究进展 | 第16-17页 |
| ·甘蔗转基因存在的问题 | 第17页 |
| ·转基因拷贝数检测主要方法 | 第17-19页 |
| ·Southern blot | 第17-18页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第18-19页 |
| ·内标准基因的开发 | 第19-21页 |
| ·内标准基因开发现状与应用 | 第19-20页 |
| ·内标准基因开发存在的问题及对策 | 第20-21页 |
| ·本研究目的及意义 | 第21-23页 |
| ·本研究技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-32页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·DNA提取及标准品稀释 | 第25-26页 |
| ·引物设计 | 第26-28页 |
| ·PCR反应体系和程序 | 第28页 |
| ·PCR产物电泳检测 | 第28页 |
| ·目的片段的回收 | 第28-29页 |
| ·重组质粒制备 | 第29页 |
| ·质粒拷贝数计算 | 第29-30页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第30页 |
| ·标准曲线的建立 | 第30页 |
| ·甘蔗基因组DNA中内标准基因的拷贝数计算 | 第30-31页 |
| ·多靶标标准质粒的构建 | 第31页 |
| ·Southern blot | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-49页 |
| ·引物特异性评价 | 第32-42页 |
| ·利用PCR评价引物特异性 | 第32-33页 |
| ·筛选出的基因及引物在甘蔗品种上的稳定性分析 | 第33-35页 |
| ·筛选出的基因及其引物的种间特异性评价 | 第35-37页 |
| ·实时荧光定量PCR检测评价引物性能 | 第37-42页 |
| ·低拷贝基因筛选 | 第42-44页 |
| ·候选内标准基因拷贝数计算 | 第42-43页 |
| ·P4H,APRT和CYC在不同甘蔗基因型上的稳定性分析 | 第43-44页 |
| ·多靶标标准质粒定量方法的建立 | 第44-47页 |
| ·P4H,APRT和CYC多靶标标准质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·P4H,APRT和CYC基因特异性定量方法的建立及拷贝数分析 | 第45-46页 |
| ·P4H,APRT和CYC定性PCR检测灵敏度 | 第46-47页 |
| ·Southern blot分析 | 第47-49页 |
| ·甘蔗基因组DNA酶切效果 | 第47-48页 |
| ·Southern blot分析 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-55页 |
| ·实验材料的选择 | 第49-51页 |
| ·供试甘蔗材料的选择 | 第49-50页 |
| ·其他植物物种材料的选择 | 第50-51页 |
| ·影响定性PCR检测技术因素分析 | 第51-52页 |
| ·实时荧光定量PCR检测技术分析 | 第52-53页 |
| ·实时荧光定量PCR检测技术的优越性 | 第52页 |
| ·实时绝对荧光定量PCR检测存在的问题 | 第52-53页 |
| ·实时荧光定量PCR拷贝数计算分析 | 第53-54页 |
| ·Southern blot分析 | 第54-55页 |
| 5 主要结论与后续工作 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 附录 | 第67-75页 |
| 附录Ⅰ 缩写词(Abbreviation) | 第67-68页 |
| 附录Ⅱ Southern blot试剂 | 第68-69页 |
| 附录Ⅲ Southern blot分析方法 | 第69-72页 |
| 附录Ⅳ 甘蔗P4H、APRT和CYC基因PCR扩增片段的同源性分析 | 第72-74页 |
| 附录Ⅴ P4H、APRT和CYC质粒酶切验证 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
