| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-32页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群菌株 | 第13-19页 |
| ·几种主要蜡状芽胞杆菌群菌株 | 第13-18页 |
| ·蜡状芽胞杆菌 | 第13-16页 |
| ·炭疽芽胞杆菌 | 第16-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第17-18页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群菌株在生物体和环境中的循环和残存 | 第18-19页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群菌株的特异性 | 第19页 |
| ·苏云金芽胞杆菌在生物防治中的应用 | 第19-27页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的基本特性 | 第19-20页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的杀虫毒素 | 第20-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫毒素的分类 | 第20-21页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫毒素的作用方式 | 第21-22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫毒素基因的定位 | 第22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫毒素蛋白的表达与调控 | 第22-24页 |
| ·PlcR蛋白的调控作用 | 第24-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌在生物防治中的应用 | 第26-27页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的安全性分析和遗传改良 | 第27-28页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的安全性分析 | 第27页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的遗传改良 | 第27-28页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群菌株间的接合转移研究 | 第28-30页 |
| ·革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌的接合转移研究 | 第29页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒在蜡状芽胞杆菌群菌株间的接合转移 | 第29-30页 |
| ·本论文研究的主要内容和意义 | 第30-32页 |
| 第2章 蜡状芽胞杆菌群菌株中部分病原相关毒素基因的检测 | 第32-41页 |
| ·材料和方法 | 第32-35页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-34页 |
| ·引物 | 第34页 |
| ·酶及主要试剂 | 第34页 |
| ·溶液 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| ·溶血性检测 | 第34页 |
| ·DNA提取 | 第34-35页 |
| ·PCR检测 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·ITS的PCR分析结果 | 第35-36页 |
| ·溶血性结果 | 第36-37页 |
| ·肠毒素基因的检测 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第3章 PXO1-ORF_(101)的克隆，表达及与病原进化相关分析 | 第41-56页 |
| ·材料与方法 | 第42-49页 |
| ·材料 | 第42-45页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·培养基，生长条件和抗生素浓度 | 第42页 |
| ·引物 | 第42页 |
| ·所用试剂盒和试剂 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳所需溶液 | 第43-44页 |
| ·蛋白质纯化试剂盒和所用试剂 | 第44页 |
| ·Vero细胞来源及毒性检测所用溶液 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·裂解法制备DNA模板，PCR反应及PCR反应产物的纯化 | 第45页 |
| ·测序和同源性分析 | 第45页 |
| ·DNA酶切和大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·外源片断和载体的连接 | 第46页 |
| ·重组质粒的构建 | 第46页 |
| ·重组质粒的大肠杆菌转化 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌重组菌株的鉴定 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE | 第48页 |
| ·His-tag融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第48页 |
| ·Vero细胞的毒性检测 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-54页 |
| ·pXO1-ORF_(101)相似片断在蜡状芽胞杆菌群菌株中的检测 | 第49页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群菌株中pXO1-ORF_(101)相似片断的序列测定 | 第49页 |
| ·pXO1-ORF_(101)相似片断的序列比较及病原进化相关分析 | 第49-52页 |
| ·pXO1-ORF_(101)相似片断的扩增和克隆 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达和蛋白纯化 | 第53页 |
| ·融合蛋白对Vero细胞的毒性 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第4章 蜡状芽胞杆菌群菌株的遗传改良——接合转移研究 | 第56-84页 |
| ·材料与方法 | 第56-67页 |
| ·材料 | 第56-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第56-57页 |
| ·培养基和抗生素 | 第57-58页 |
| ·引物 | 第58页 |
| ·试剂，酶，溶液 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-67页 |
| ·利福平突变株筛选 | 第59页 |
| ·随机扩增DNA多态性分析(RAPD)和特异性PCR扩增 | 第59-60页 |
| ·PCR产物平端连接克隆 | 第60页 |
| ·DNA酶切 | 第60-61页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第61页 |
| ·对苏云金芽胞杆菌以色列亚种的抗性标记 | 第61-65页 |
| ·重组质粒的大肠杆菌转化 | 第65-66页 |
| ·Bt的电击转化 | 第66页 |
| ·热处理突变温度敏感复制子 | 第66页 |
| ·接合转移实验 | 第66-67页 |
| ·稳定性检测实验 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-80页 |
| ·利福平突变株的筛选及RAPD检测突变株的遗传图谱 | 第67-69页 |
| ·对苏云金芽胞杆菌以色列亚种的抗性标记 | 第69-74页 |
| ·同源重组 | 第69-72页 |
| ·转化 | 第72-74页 |
| ·接合转移研究 | 第74-75页 |
| ·pHT73的接合转移实验结果 | 第74-75页 |
| ·pBtoxis的接合转移实验结果 | 第75页 |
| ·pHT73的接合转移子RAPD图谱分析和PCR检测 | 第75-77页 |
| ·pBtoxis的接合转移子RAPD图谱分析和PCR检测 | 第77-78页 |
| ·pBtoxis的转移能力，频率，宿主范围 | 第78页 |
| ·接合子部分生长曲线测定及代时的估算 | 第78-79页 |
| ·接合子稳定性 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-84页 |
| ·通过接合转移技术进行遗传改良的目的 | 第80页 |
| ·抗性标记的影响 | 第80-81页 |
| ·转座子插入的影响 | 第81页 |
| ·稳定性检测的方法 | 第81-82页 |
| ·质粒之间的排斥和竞争 | 第82-83页 |
| ·关于新接合转移系统 | 第83-84页 |
| 第5章 蜡状芽胞杆菌群菌株的遗传改良——接合转移子的性质研究 | 第84-96页 |
| ·材料与方法 | 第84-86页 |
| ·材料 | 第84-85页 |
| ·菌株 | 第84页 |
| ·培养基和抗生素 | 第84页 |
| ·试剂，酶，溶液 | 第84页 |
| ·供试昆虫 | 第84-85页 |
| ·材料 | 第85-86页 |
| ·大质粒的提取和电泳图分析 | 第85页 |
| ·SDS-PAGE | 第85页 |
| ·相差显微镜下观察芽胞晶体 | 第85页 |
| ·对库蚊幼虫和棉铃虫幼虫的生物测定 | 第85-86页 |
| ·结果 | 第86-93页 |
| ·宿主范围，转移能力及稳定性比较 | 第86页 |
| ·接合转移子的质粒图谱分析 | 第86-87页 |
| ·获得质粒pBtoxis的接合转移子的质粒图谱分析 | 第86-87页 |
| ·获得质粒pHT73的接合转移子的质粒图谱分析 | 第87页 |
| ·接合转移子毒素蛋白的表达 | 第87-90页 |
| ·获得质粒pBtoxis的接合转移子杀蚊毒素蛋白的表达 | 第87-88页 |
| ·获得pHT73的接合转移子的毒素蛋白的表达 | 第88-90页 |
| ·晶体观察 | 第90页 |
| ·获得pBtoxis的接合转移子的毒素蛋白晶体的形成 | 第90页 |
| ·获得pHT73的接合转移子的毒素蛋白晶体的形成 | 第90页 |
| ·生物测定 | 第90-91页 |
| ·工程菌株的溶血活性分析 | 第91-92页 |
| ·苏云金芽胞杆菌几种接合转移质粒性质比较 | 第92-93页 |
| ·小结和讨论 | 第93-96页 |
| 第6章 蜡状芽胞杆菌群菌株的遗传改良——PLCR的敲除 | 第96-107页 |
| ·材料与方法 | 第96-105页 |
| ·材料 | 第96-98页 |
| ·菌种和质粒 | 第96页 |
| ·培养基及抗生素 | 第96-97页 |
| ·试剂和溶液 | 第97-98页 |
| ·引物 | 第98页 |
| ·供试蚊虫 | 第98页 |
| ·方法 | 第98-100页 |
| ·DNA提取和PCR检测 | 第98页 |
| ·质粒DNA提取 | 第98页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群菌株的电击转化 | 第98-99页 |
| ·热处理法筛选同源重组的转化子菌株 | 第99页 |
| ·SDS-PAGE | 第99页 |
| ·光学显微镜下观察芽胞晶体 | 第99页 |
| ·生物测定 | 第99-100页 |
| ·溶血性检测 | 第100页 |
| ·结果 | 第100-105页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群菌株中plcR的PCR检测 | 第100-101页 |
| ·plcR基因插入失活后的重组菌株的筛选和鉴定 | 第101-102页 |
| ·重组菌株杀虫晶体蛋白的表达和晶体形成情况 | 第102-104页 |
| ·重组菌株对蚊幼虫的毒力 | 第104页 |
| ·重组菌株溶血性检测 | 第104-105页 |
| ·讨论和小结 | 第105-107页 |
| 第7章 结论与展望 | 第107-109页 |
| ·结论 | 第107-108页 |
| ·展望 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-120页 |
| 发表文章目录 | 第120-121页 |
| 国际会议摘要目录 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
