| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-18页 |
| 1 稀有鮈鲫研究现状 | 第11-12页 |
| 2 鱼类卵黄蛋白原研究现状 | 第12-14页 |
| ·卵黄蛋白原的结构 | 第12-13页 |
| ·卵黄蛋白原的种类 | 第13页 |
| ·卵黄蛋白原的功能 | 第13-14页 |
| 3 基因克隆方法介绍 | 第14-17页 |
| 4 实时荧光定量 PCR | 第17-18页 |
| 第一章 稀有鮈鲫卵黄蛋白原基因序列的克隆与析 | 第18-40页 |
| 1．实验材料和方法 | 第18-28页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第18页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-28页 |
| ·稀有鮈鲫基因组 DNA 的提取 | 第20页 |
| ·DNA 质量检测 | 第20页 |
| ·构建稀有鮈鲫基因组文库 | 第20-23页 |
| ·稀有鮈鲫基因组 DNA 的酶切检测 | 第21页 |
| ·稀有鮈鲫基因组 DNA 的大量酶切 | 第21-22页 |
| ·基因组 DNA 酶切产物的纯化 | 第22页 |
| ·纯化后的酶切产物与 GENOMEWALKERADAPTOR 连接 | 第22-23页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·PCR 扩增和扩增产物检测 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物回收与 T 载体连接 | 第24-26页 |
| ·序列拼接 | 第26页 |
| ·巢式 PCR | 第26-27页 |
| ·序列分析 | 第27-28页 |
| 2.结果与分析 | 第28-38页 |
| ·稀有鮈鲫基因组 DNA 完整性与纯度的检测 | 第28页 |
| ·克隆结果 | 第28-29页 |
| ·稀有鮈鲫卵黄蛋白原 5'端基因步移结果 | 第29-30页 |
| ·稀有鮈鲫卵黄蛋白原基因序列分析 | 第30-37页 |
| ·稀有鮈鲫卵黄蛋白原基因上游调控序列分析 | 第37-38页 |
| ·稀有鮈鲫卵黄蛋白原基因序列分析 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| ·稀有鮈鲫卵黄蛋白原基因与斑马鱼卵黄蛋白原基因的比较 | 第38-40页 |
| ·稀有鮈鲫卵黄蛋白原上游调控因子 | 第40页 |
| 第二章 稀有鮈鲫卵黄蛋白原基因在卵巢发育不同时期表达情况定量分析 | 第40-53页 |
| 1.实验材料和方法 | 第41-46页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-46页 |
| ·稀有鮈鲫肝脏样品采集分期 | 第41-42页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第42页 |
| ·甲醛变性胶电泳 | 第42-43页 |
| ·CDNA 的合成 | 第43-45页 |
| ·引物的设计以及合成 | 第45页 |
| ·引物检测 | 第45-46页 |
| ·荧光定量 PCR 检测 | 第46页 |
| 2．结果 | 第46-51页 |
| ·RNA 完整性分析 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR 序列以及保守性分析 | 第47-48页 |
| ·内参引物的验证结果 | 第47-48页 |
| ·目的引物验证结果 | 第48页 |
| ·荧光定量 PCR 分析 | 第48-51页 |
| ·荧光定量 PCR 特异性分析 | 第48-49页 |
| ·稀有鮈鲫卵黄蛋白原 M RNA 荧光定量 PCR 标准曲线 | 第49-50页 |
| ·卵黄蛋白原 MRNA 基因各时期相对表达量分析 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
