| 中文摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-34页 |
| 1 2,3-二羟基联苯双加氧酶的概况 | 第19-22页 |
| ·双加氧酶概述 | 第19-20页 |
| ·外部双加氧酶的分类 | 第20-21页 |
| ·2,3-二羟基联苯双加氧酶的结构 | 第21页 |
| ·2,3-二羟基联苯双加氧酶的催化机制 | 第21-22页 |
| 2 2,3-二羟基联苯双加氧酶的多样性 | 第22-26页 |
| ·不同微生物中BphC的多样性和功能 | 第22-24页 |
| ·BphC的一级结构比较 | 第24-25页 |
| ·BphC的二级结构比较 | 第25-26页 |
| 3 2,3-二羟基联苯双加氧酶的聚合形态 | 第26-28页 |
| ·不同菌种中BphC的聚合形态 | 第26页 |
| ·包涵体组成成分 | 第26-27页 |
| ·包涵体形成原因 | 第27页 |
| ·包涵体特点 | 第27页 |
| ·包涵体研究进展 | 第27-28页 |
| 4 本论文研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-34页 |
| 第二章 Rhodococcus sp.R04中2,3-二羟基联苯1,2-双加氧酶多样性 | 第34-44页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·菌株和载体 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-37页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中8个BphC基因的序列分析 | 第35页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中8个BphC一级结构序列比对 | 第35页 |
| ·建立系统发育树 | 第35页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中8个BphC基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·8个BphC基因的表达 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-41页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中8个BphC基因的序列分析 | 第37页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中8个BphC一级结构序列比对分析 | 第37页 |
| ·BphC系统发育分析 | 第37-38页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中8个BphC基因的扩增及重组子的鉴定 | 第38页 |
| ·8个BphC的表达 | 第38-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第三章 具有活性的BphC2包涵体及其生化特性 | 第44-60页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| ·菌株和载体 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-48页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中2,3-二羟基联苯双加氧酶基因bphC2的克隆 | 第45页 |
| ·BphC2的表达 | 第45页 |
| ·可溶性BphC2的纯化 | 第45-46页 |
| ·包涵体的纯化 | 第46页 |
| ·酶活及蛋白含量测定 | 第46-47页 |
| ·纯化的可溶性BphC2和包涵体的化学修饰 | 第47页 |
| ·纯化的可溶性BphC2和包涵体的热稳定性测定 | 第47页 |
| ·具有活性包涵体的酶活性与浊度测定 | 第47-48页 |
| ·HOPDA的荧光共谱扫描 | 第48页 |
| ·DeltaVision观察宿主菌中包涵体的位置 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-56页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中bphC2的扩增及重组子的鉴定 | 第48页 |
| ·BphC2的表达 | 第48页 |
| ·可溶性BphC2的纯化 | 第48-50页 |
| ·包涵体的纯化 | 第50页 |
| ·化学修饰剂对纯化的可溶性BphC2和包涵体酶活的影响 | 第50-51页 |
| ·纯化的可溶性BphC2和包涵体的热稳定性 | 第51-52页 |
| ·具有活性包涵体的酶活性与浊度的比值 | 第52-54页 |
| ·HOPDA的荧光共谱分析 | 第54-55页 |
| ·确定诱导后的宿主菌中包涵体的位置 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 第四章 截短型BphC2的表达纯化和部分性质研究 | 第60-71页 |
| 1 材料 | 第60-61页 |
| ·菌株和载体 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60-61页 |
| ·主要的酶和化学试剂 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-63页 |
| ·C-端截短型bphC2的克隆 | 第61页 |
| ·突变体重组质粒的构建 | 第61页 |
| ·C-端截短型BphC2的表达 | 第61页 |
| ·C-端截短型BphC2的纯化 | 第61-62页 |
| ·酶活性测定 | 第62-63页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第63页 |
| ·突变酶的热稳定性测定 | 第63页 |
| ·突变酶寡聚体分析 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-68页 |
| ·C-端截短型bphC2的克隆 | 第63-64页 |
| ·C-端截短型bphC2的表达 | 第64页 |
| ·C-端截短型BphC2的纯化 | 第64-65页 |
| ·野生型BphC2_(295)和突变酶的动力学常数 | 第65-66页 |
| ·突变酶的热稳定性变化 | 第66页 |
| ·突变酶的分子形式 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 第五章 Rhodococcus sp.R04 BphC8的纯化和部分性质研究 | 第71-79页 |
| 1 材料 | 第71页 |
| ·菌株和载体 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71页 |
| ·主要化学试剂 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-73页 |
| ·Rhodococcus sp.R04 BphC8的纯化 | 第71页 |
| ·最适pH和pH稳定性测定 | 第71-72页 |
| ·最适温度和热稳定性测定 | 第72页 |
| ·天然分子量的测定 | 第72页 |
| ·金属离子和某些化合物对BphC8酶活性的影响 | 第72页 |
| ·动力学参数的测定 | 第72页 |
| ·圆二色性分析 | 第72-73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-77页 |
| ·Rhodococcus sp.R04 BphC8的纯化 | 第73页 |
| ·BphC8最适pH和pH稳定性测定 | 第73页 |
| ·BphC8最适温度和热稳定性测定 | 第73-74页 |
| ·BphC8的天然分子量的测定 | 第74-75页 |
| ·金属离子和某些化合物对BphC8酶活性的影响 | 第75-76页 |
| ·BphC8对不同底物的动力学参数 | 第76页 |
| ·BphC8的圆二色性 | 第76页 |
| ·Rhodococcus sp.R04中三个BphC的比较 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简况及联系方式 | 第82-84页 |
