| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-22页 |
| 第一章 肿瘤标志物在原发性肝癌早期诊断中的应用 | 第22-45页 |
| ·原发性肝癌及其诊断 | 第22-24页 |
| ·原发性肝癌 | 第22-23页 |
| ·原发性肝癌的诊断 | 第23-24页 |
| ·原发性肝癌的早期诊断方法 | 第24-30页 |
| ·成像技术进行组织学观察 | 第24-25页 |
| ·分子诊断学在肝癌早期诊断中的应用 | 第25-27页 |
| ·体液检测在肝癌早期诊断中的应用 | 第27-30页 |
| ·血清肿瘤标志物的检测方法 | 第30-40页 |
| ·均相免疫分析 | 第30-31页 |
| ·非均相免疫分析 | 第31-35页 |
| ·抗体/抗原在固相载体表面的包被 | 第32页 |
| ·物理吸附作用的固相载体 | 第32-33页 |
| ·共价键包被的固相载体 | 第33-34页 |
| ·新的固相载体的应用以及表面修饰技术 | 第34-35页 |
| ·非标记免疫分析 | 第35-36页 |
| ·标记免疫分析 | 第36-38页 |
| ·原发性肝癌肿瘤标志物检测研究现状 | 第38-40页 |
| ·化学发光酶免疫分析方法(CLEIA) | 第40-42页 |
| ·HRP标记的CLEIA | 第40-42页 |
| ·ALP标记的CLEIA | 第42页 |
| ·免疫分析在肿瘤标志物检测中需解决的主要问题及其展望 | 第42-43页 |
| ·本课题研究背景、研究内容及意义 | 第43-45页 |
| 第二章 管式磁性微粒子化学发光酶免疫分析方法检测血清AFP | 第45-67页 |
| 一 引言 | 第45-46页 |
| 二 ALP-AMPPD发光体系的管式磁性微粒子化学发光酶免疫分析 | 第46-56页 |
| ·实验部分 | 第46-49页 |
| ·仪器和试剂 | 第46页 |
| ·缓冲溶液 | 第46-47页 |
| ·抗FITC单克隆抗体包被磁微粒的制备 | 第47页 |
| ·FITC标记的AFP单克隆抗体的制备 | 第47页 |
| ·ALP标记AFP抗体的制备 | 第47-48页 |
| ·标准品配制 | 第48页 |
| ·磁颗粒化学发光酶免疫分析流程 | 第48页 |
| ·微孔板化学发光酶免疫分析流程 | 第48-49页 |
| ·交叉反应及数据分析 | 第49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-56页 |
| ·标准品基质的选择 | 第49-50页 |
| ·免疫试剂用量对方法灵敏度、特异性和检测范围的影响 | 第50-51页 |
| ·免疫反应时间的影响 | 第51页 |
| ·磁颗粒浓度和捕获免疫复合物时间的优化 | 第51-52页 |
| ·化学发光底物液用量的优化以及发光反应动力学研究 | 第52-53页 |
| ·分析参数的考察 | 第53-55页 |
| ·交叉反应研究 | 第55页 |
| ·方法精密性的研究 | 第55页 |
| ·本实验所建立的MPs-CLEIA方法测定实际血清样本AFP测值与RIA测值的相关性研究 | 第55-56页 |
| 三 HRP-Luminol/H_2O_2发光体系的管式磁性微粒子化学发光酶免疫分析 | 第56-66页 |
| ·实验部分 | 第56-59页 |
| ·试剂和仪器 | 第56-57页 |
| ·缓冲溶液 | 第57页 |
| ·HRP标记抗体的制备 | 第57页 |
| ·HRP-Luminol/H_2O_2发光体系磁性微粒子化学发光免疫分析 | 第57-58页 |
| ·磁颗粒表面抗体的包被 | 第57-58页 |
| ·免疫分析流程 | 第58页 |
| ·直接管式包被HRP-Luminol/H_2O_2发光体系化学发光免疫分析 | 第58-59页 |
| ·六角形包被管的抗体包被 | 第58页 |
| ·直接管式包被HRP-Luminol/H_2O_2发光体系化学发光免疫分析流程 | 第58-59页 |
| ·实际血清样本中AFP含量测定 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-66页 |
| ·直接管式包被与磁颗粒包被的AFP单克隆抗体参数的优化以及两种方法的比较 | 第59-61页 |
| ·磁颗粒表面AFP单克隆抗体的包被 | 第59-60页 |
| ·六角形包被管表面AFP单克隆抗体的包被 | 第60-61页 |
| ·HRP-AFP Abs用量的优化及两者种方法的对比 | 第61页 |
| ·免疫反应时间的优化以及两种方法对比 | 第61-62页 |
| ·Luminol/H_2O_2发光底物液体积的优化 | 第62页 |
| ·HRP催化Luminol/H_2O_2发光底物液反应动力学研究 | 第62-63页 |
| ·分析参数 | 第63-64页 |
| ·方法精密度研究 | 第64页 |
| ·方法特异性研究 | 第64页 |
| ·MPs-CLEIA检测实际血清样本中的AFP含量,并与商品化电致化学发光试剂盒检测结果对比 | 第64-66页 |
| 四 本章结论 | 第66-67页 |
| 第三章 原发性肝癌肿瘤标志物Glypican-3血清学检测方法的建立以及临床应用 | 第67-91页 |
| 一 引言 | 第67-68页 |
| 二 建立竞争放射免疫分析方法检测血清Glypican-3以及初步临床应用研究 | 第68-79页 |
| ·实验部分 | 第68-70页 |
| ·仪器及试剂 | 第68页 |
| ·病人血清样本的采集 | 第68-69页 |
| ·~(125)I标记GPC3的制备以及其活性研究 | 第69页 |
| ·标准品的制备 | 第69页 |
| ·实验条件的优化 | 第69-70页 |
| ·免疫分析流程 | 第70页 |
| ·化学发光免疫分析检测AFP以及CA199 | 第70页 |
| ·数据分析 | 第70页 |
| ·实验结果 | 第70-78页 |
| ·~(125)I-GPC3的活性研究 | 第70-71页 |
| ·实验条件的优化 | 第71-73页 |
| ·GPC3抗体浓度的优化 | 第71页 |
| ·缓冲液pH的选择以及缓冲液中表面活性的影响 | 第71-72页 |
| ·免疫反应时间的优化 | 第72-73页 |
| ·方法技术参数的考察 | 第73-75页 |
| ·特异性 | 第73-74页 |
| ·检测灵敏度 | 第74页 |
| ·准确度 | 第74页 |
| ·回收率 | 第74-75页 |
| ·线性稀释效应 | 第75页 |
| ·血清学GPC3区分正常肝人群、良性肝脏疾病人群 | 第75-76页 |
| ·GPC3临床诊断灵敏度、特异性研究,并且与AFP、AFP/CA19-9联合检测进行对比 | 第76-77页 |
| ·血清GPC3含量检测在HCC治疗和肿瘤扩散中的监测作用 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| 三 建立纳米磁颗粒化学发光酶免疫分析方法检测血清Glypican-3以及临床应用研究 | 第79-90页 |
| ·实验部分 | 第79-81页 |
| ·仪器及试剂 | 第79-80页 |
| ·病人血清的采集 | 第80页 |
| ·生物素化GPC3抗体的制备 | 第80页 |
| ·链亲和素修饰磁颗粒以及GPC3抗体包被磁颗粒的制备 | 第80-81页 |
| ·基于纳米磁颗粒以及微米磁颗粒化学发光免疫分析方法的建立 | 第81页 |
| ·数据分析 | 第81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-90页 |
| ·B-GPC3抗体和HRP-GPC3浓度的优化 | 第81-82页 |
| ·磁颗粒浓度的优化 | 第82-84页 |
| ·磁颗粒粒径对免疫分析时间的影响 | 第84页 |
| ·磁颗粒粒径对化学发光动力学的影响 | 第84-86页 |
| ·分析参数 | 第86页 |
| ·标准曲线和线性稀释实验 | 第86-87页 |
| ·血清GPC3纳米磁颗粒化学发光免疫分析方法用于诊断原发性肝癌时cut-off值的确定 | 第87-88页 |
| ·检测血清GPC3在HCC、肝硬化和继发性肝癌人群中的水平 | 第88-90页 |
| 四 本章小结 | 第90-91页 |
| 第四章 基于微流控芯片的原发性肝癌相关肿瘤标志物的化学发光酶免疫分析方法联合检测 | 第91-102页 |
| ·引言 | 第91-92页 |
| ·实验部分 | 第92-95页 |
| ·试剂和器材 | 第92页 |
| ·微通道结构的设计 | 第92-93页 |
| ·微流控芯片的加工 | 第93-94页 |
| ·微流控芯片通道的抗体包被 | 第94页 |
| ·微流控芯片上AFP和Ferri同时检测的免疫分析流程 | 第94-95页 |
| ·微孔板免疫分析检测AFP和Ferri | 第95页 |
| ·结果与讨论 | 第95-100页 |
| ·APTES直接修饰微通道抗体包被性能研究 | 第95-96页 |
| ·芯片通道特异性研究 | 第96-97页 |
| ·标准曲线 | 第97-98页 |
| ·方法分析参数 | 第98-99页 |
| ·微流控芯片平台发光反应动力学研究 | 第99页 |
| ·实际样本中AFP和Ferri的同时检测以及与常规板式发光试剂盒测值的比较 | 第99-100页 |
| ·本章小结 | 第100-102页 |
| 第五章 基于微流控芯片的血液中肝癌细胞的快速化学发光检测 | 第102-115页 |
| ·引言 | 第102-103页 |
| ·实验部分 | 第103-106页 |
| ·试剂和仪器 | 第103页 |
| ·微通道结构的设计 | 第103-104页 |
| ·微流控芯片的加工 | 第104页 |
| ·细胞培养以及荧光染色 | 第104-105页 |
| ·GPC3抗体包被磁颗粒 | 第105页 |
| ·显微镜下观察GPC3抗体包被的磁颗粒对肝癌细胞的识别与捕获 | 第105-106页 |
| ·肝癌细胞化学发光检测 | 第106页 |
| ·结果与讨论 | 第106-113页 |
| ·芯片上液体的混合 | 第106-107页 |
| ·显微镜下观察GPC3抗体包被的磁颗粒对肝癌细胞的特异性识别 | 第107页 |
| ·微流控芯片上的细胞捕获与识别 | 第107-110页 |
| ·细胞捕获区磁颗粒固定和细胞的捕获 | 第107-108页 |
| ·细胞捕获效率的研究 | 第108-110页 |
| ·微流控芯片上肝癌细胞的化学发光检测参数优化 | 第110-112页 |
| ·化学发光定量检测肝癌细胞以及实际血液的检测 | 第112-113页 |
| ·本章小结 | 第113-115页 |
| 第六章 结论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第133-135页 |
| 作者简介 | 第135页 |
| 导师简介 | 第135-136页 |
| 附件 | 第136-137页 |
