| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| ·化脓隐秘杆菌感染的概况 | 第10-11页 |
| ·化脓隐秘杆菌病原学概述 | 第11页 |
| ·化脓隐秘杆菌的主要毒力因子 | 第11-14页 |
| ·溶血素 pyolysin | 第11-12页 |
| ·神经氨酸酶 Neuraminidases | 第12页 |
| ·胶原结合蛋白 Collagen-Binding Protein | 第12-13页 |
| ·菌毛合成蛋白 Fimbriae | 第13页 |
| ·其他毒力因子 | 第13-14页 |
| ·胆固醇依赖性的溶细胞素 | 第14-15页 |
| ·CDCs | 第14页 |
| ·PLO 与 CDCs | 第14-15页 |
| ·巨噬细胞 | 第15-18页 |
| ·巨噬细胞与免疫 | 第15页 |
| ·巨噬细胞的生物学功能 | 第15-16页 |
| ·巨噬细胞源性的细胞因子 | 第16-17页 |
| ·细胞凋亡及其途径 | 第17页 |
| ·细胞凋亡的检测方法 | 第17-18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| ·材料 | 第19-22页 |
| ·试验动物、细胞 | 第19页 |
| ·菌种与质粒 | 第19页 |
| ·引物设计与合成 | 第19页 |
| ·主要试剂及抗体 | 第19-20页 |
| ·主要溶液的配制 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·化脓隐秘杆菌溶血素基因的克隆与表达 | 第22-29页 |
| ·plo 的克隆与表达 | 第22-24页 |
| ·兔抗 His-PLO 多克隆抗体的制备与反应性分析 | 第24-25页 |
| ·表达蛋白的溶血活性及其多抗的抗溶血活性 | 第25-26页 |
| ·溶血素诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 凋亡的检测 | 第26-28页 |
| ·溶血素诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 分泌细胞因子检测 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-42页 |
| ·化脓隐秘杆菌溶血素基因的克隆与表达 | 第29-32页 |
| ·plo 基因的克隆 | 第29页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·溶血素蛋白的原核表达 | 第30-31页 |
| ·重组溶血素蛋白的 Western blot 鉴定 | 第31页 |
| ·溶血素蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·兔抗 His-PLO 多克隆抗体的制备与反应性分析 | 第32-33页 |
| ·Western blot 分析 | 第32-33页 |
| ·琼脂双扩散试验分析 | 第33页 |
| ·兔抗 His-PLO 蛋白多克隆抗体效价测定 | 第33页 |
| ·溶血试验 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白 His-PLO 的溶血试验 | 第33-34页 |
| ·多抗中和 His-PLO 的抗溶血活性 | 第34-35页 |
| ·溶血素诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 凋亡的影响 | 第35-42页 |
| ·His-PLO 对小鼠巨噬细胞损伤的形态观察 | 第35-36页 |
| ·His-PLO 蛋白抑制 RAW264.7 细胞生长 | 第36-37页 |
| ·DNA Ladder 分析 | 第37-38页 |
| ·流式细胞仪检测 RAW264.7 细胞凋亡率 | 第38页 |
| ·caspase 3 的活性检测 | 第38-39页 |
| ·细胞因子检测结果 | 第39-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·溶血素蛋白的原核表达 | 第42页 |
| ·溶血素蛋白试验剂量的选择 | 第42页 |
| ·溶血素与炎症反应 | 第42-43页 |
| ·溶血素与细胞凋亡 | 第43页 |
| ·溶血素、炎症反应、细胞凋亡与感染免疫 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第50页 |
