| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| ·植物细胞色素 P450 概述 | 第9页 |
| ·植物 P450 基因功能研究方法 | 第9-11页 |
| ·酵母表达体系在植物 P450 基因功能验证中的应用 | 第9-10页 |
| ·植物转基因技术在植物 P450 基因功能验证中的应用 | 第10-11页 |
| ·植物类黄酮代谢相关 P450 | 第11-16页 |
| ·植物类黄酮代谢相关 P450 概述 | 第11-13页 |
| ·P450 基因在类黄酮 B 环羟基化反应中的作用 | 第13-16页 |
| 2 引言 | 第16-18页 |
| ·课题的立题背景及意义 | 第16页 |
| ·研究的主要内容 | 第16-17页 |
| ·课题来源 | 第17-18页 |
| 3 材料和方法 | 第18-31页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·菌株、质粒 | 第18页 |
| ·仪器与试剂 | 第18-20页 |
| ·主要药品和试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·主要试剂的配方 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-31页 |
| ·茶树粗酶液中 F3’5’H 酶体外活性检测 | 第20-21页 |
| ·基因克隆 | 第21-24页 |
| ·原核表达 | 第24-26页 |
| ·真核表达 | 第26-27页 |
| ·异源植物转基因功能验证 | 第27-29页 |
| ·表达特异性分析 | 第29-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-50页 |
| ·茶树 F3’5’H 基因的全长克隆 | 第31-33页 |
| ·RNA 质量检测 | 第31页 |
| ·RACE 结果 | 第31-33页 |
| ·P450 生物信息学分析 | 第33-36页 |
| ·F3’5’H 基因组信息分析 | 第33页 |
| ·CsF3’5’H 和 CsF3’H 序列分析 | 第33-35页 |
| ·CsF3’5’H 进化树分析 | 第35-36页 |
| ·CSF3’5’H 在大肠杆菌中的表达、温度条件的优化及蛋白纯化 | 第36-38页 |
| ·原核表达 | 第36-37页 |
| ·原核表达条件优化 | 第37页 |
| ·CsF3’5’H 融合蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·真核表达 | 第38-44页 |
| ·CsF3’5’H、VvF3’5’H、PhF3’5’H-1、PhF3’5’H-2 真核表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·酶活测定 | 第39-44页 |
| ·异源模式植物表达 | 第44-46页 |
| ·CsF3’5’H 异源植物表达质粒构建 | 第44页 |
| ·异源表达载体侵染烟草 | 第44页 |
| ·转基因烟草粗酶活性检测 | 第44-46页 |
| ·茶树体内 B 环羟基化基因的体外酶活证据及表达特异性分析 | 第46-50页 |
| 5 讨论 | 第50-52页 |
| ·CSF3’5’H 的原核表达 | 第50页 |
| ·CSF3’5’H 的真核表达、异源植物表达与体外酶活测定 | 第50-51页 |
| ·类黄酮 B 环羟基化相关的功能基因的表达差异 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 英文缩写及注释 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
