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多氯联苯类环境激素的实时定量免疫PCR检测方法研究

摘要第1-8页
Abstract第8-17页
第一章 绪论第17-37页
   ·多氯联苯及其环境激素特征概述第17-21页
     ·多氯联苯的化学结构和命名第17-18页
     ·多氯联苯的生产和使用第18页
     ·多氯联苯的理化性质及其环境行为第18-20页
     ·多氯联苯的生物毒性和环境激素特征第20-21页
   ·多氯联苯的环境标准第21-22页
   ·多氯联苯的检测方法概述第22-26页
     ·色谱仪器分析检测方法第22-24页
     ·生物分析技术第24-25页
     ·免疫学检测方法第25-26页
   ·免疫 PCR 技术概述第26-33页
     ·PCR 技术的原理、特点和在环境中的应用第26-27页
     ·免疫 PCR (IPCR) 分析技术概述第27-30页
     ·实时荧光定量免疫 PCR (rt-IPCR) 技术的特点与应用第30-33页
   ·课题研究意义、思路以及实验方案第33-37页
     ·本课题的研究意义第33页
     ·课题的研究思路与实验方案第33-35页
     ·本课题的创新之处第35-37页
第二章 多氯联苯同系物的合成方法研究第37-44页
   ·多氯联苯同系物的合成方法概况第37页
   ·氯化铜还原法制备多氯联苯第37-39页
     ·实验仪器与试剂第37-38页
     ·合成路线与实验步骤第38页
     ·结果与讨论第38-39页
   ·改性 GOMBERG-BACHMANN 法制备多氯联苯第39-43页
     ·合成路线与实验步骤第39-40页
     ·结果与讨论第40-42页
     ·结论第42-43页
   ·本章小结第43-44页
第三章 多氯联苯类环境激素半抗原与抗原的合成及表征第44-64页
   ·半抗原与抗原的概念和合成原理第44-47页
     ·半抗原与抗原的概念第44-45页
     ·半抗原与抗原对抗体形成的作用第45页
     ·半抗原与抗原的合成原理第45-46页
     ·多氯联苯环境激素的抗原合成路线第46-47页
   ·实验仪器与试剂第47-48页
     ·实验仪器第47页
     ·实验试剂第47-48页
     ·3,4 -二氯联苯(PCB12)抗原的合成第48-49页
     ·PCB12 半抗原的合成第48-49页
     ·PCB12 全抗原的合成第49页
   ·3, 4,4’-三氯联苯(PCB37)抗原的合成第49-51页
     ·PCB37 半抗原合成路线第49-50页
       ·PCB37 人工抗原的合成第50-51页
   ·3,3’,4,4’-四氯联苯(PCB77)抗原的合成第51-52页
     ·PCB77 半抗原的合成第51-52页
     ·PCB77 抗原的合成第52页
   ·半抗原与人工抗原的鉴定第52-53页
       ·紫外光谱扫描鉴定第52-53页
     ·考马斯亮蓝法测定蛋白质含量第53页
   ·结果与讨论第53-61页
     ·PCB12 半抗原的鉴定第53-55页
     ·PCB12 抗原的表征第55页
     ·PCB37 半抗原的鉴定第55-57页
     ·PCB37 抗原的鉴定第57页
     ·PCB77 半抗原的鉴定第57-59页
     ·PCB77 抗原的表征第59-60页
     ·人工抗原浓度和结合比的测定第60-61页
   ·合成实验条件优化的选择第61-63页
     ·半抗原合成实验条件的选择和优化第61-62页
     ·抗原的合成与纯化第62-63页
   ·本章小结第63-64页
第四章 三种多氯联苯类环境激素的抗体制备第64-86页
   ·抗体与免疫检测第64-65页
     ·抗体的特点与免疫检测原理第64页
     ·抗体的产生机理与种类第64-65页
   ·实验部分第65-71页
     ·实验仪器第65-66页
     ·实验动物与试剂第66页
     ·特殊试剂配制第66-67页
     ·免疫方案与过程第67-69页
     ·血样的采集与效价测试第69-71页
       ·试管凝集反应实验第69-70页
       ·双向琼脂扩散法侧定抗血清的效价第70-71页
   ·抗体的制备与纯化第71-77页
     ·血清的采集第71-72页
     ·抗体纯化原理与方法第72-73页
     ·饱和硫酸铵盐析法纯化抗体第73页
     ·除盐第73-75页
     ·离子交换层析法精制第75-77页
     ·纯化抗体的性质测定第77页
   ·结果与讨论第77-84页
     ·PCB12 抗体制备的结果与讨论第77-81页
     ·PCB37 抗体的制备结果与讨论第81-82页
     ·PCB77 的抗体制备的结果与讨论第82-84页
   ·本章小结第84-86页
第五章 间接竞争实时免疫 PCR 法测定多氯联苯类环境激素第86-127页
   ·引言第86页
   ·实验仪器与试剂第86-88页
     ·实验仪器第86-87页
     ·实验试剂第87-88页
   ·实验方法第88-99页
     ·间接竞争 rt-IPCR 法测定 PCBs 的原理第88页
     ·生物素化 DNA 的合成与纯化第88-93页
     ·生物素化 DNA 的鉴定和浓度的测定第93-94页
     ·PCR 管的戊二醛预处理第94-95页
     ·间接竞争 Rt-IPCR 测定 PCBs 方法的建立第95-96页
     ·间接竞争 rt-IPCR 分析方法条件的优化第96-99页
     ·间接竞争 rt-IPCR 分析方法特异性评价第99页
   ·方法准确性—环境样品测定和加标回收实验第99-102页
     ·样品采集第99-100页
     ·样品处理与萃取第100-101页
     ·加标回收实验第101-102页
   ·结果与讨论第102-108页
     ·聚丙烯 PCR 管的处理第102页
     ·生物素化 DNA 的鉴定第102-105页
     ·包被介质的优化第105页
     ·包被时间的影响第105-106页
     ·封闭液的选择和优化第106页
     ·亲和素与生物素化 DNA 浓度的优化第106-107页
     ·有机溶剂对免疫 PCR 检测结果的影响第107-108页
   ·间接竞争 Rt-IPCR 法测定 PCBs 标准曲线的建立与环境样品测试第108-124页
     ·PCB12 间接竞争 rt-IPCR 分析方法标准曲线的建立第108-114页
     ·PCB37 的间接竞争 rt-IPCR 检测方法方法的建立第114-120页
     ·PCB77 的间接竞争 rt-IPCR 检测方法方法的建立第120-124页
   ·间接竞争 Rt-IPCR 法与 GC/MS 法测定多氯联苯的比较第124-125页
   ·本章小结第125-127页
第六章 直接竞争实时免疫 PCR 法测定多氯联苯类环境激素第127-152页
   ·引言第127页
   ·实验仪器与试剂第127-128页
     ·实验仪器第127页
     ·实验试剂第127-128页
   ·实验方法第128-133页
     ·生物素化抗体的制备第128-130页
     ·直接竞争 rt-IPCR 测定 PCBs 的原理第130-131页
     ·直接竞争 rt-IPCR 的一般步骤第131-132页
     ·直接竞争 rt-IPCR 分析方法的条件优化第132页
     ·直接竞争 rt-IPCR 分析方法标准曲线的建立第132-133页
     ·直接竞争 rt-IPCR 分析方法特异性评价第133页
     ·方法准确性—样品测定和加标回收实验第133页
   ·结果与讨论第133-135页
     ·包被介质的影响第133页
     ·包被时间的影响第133-134页
     ·封闭液的影响第134页
     ·亲和素与生物素化 DNA 浓度的优化第134-135页
   ·直接竞争 Rt-IPCR 分析方法测定 PCBS 的标准曲线及实际样品的测定第135-150页
   ·直接竞争 RT-IPCR 法与 GC/MS 法测定多氯联苯的比较第150-151页
   ·本章小结第151-152页
第七章 固相抗体竞争实时免疫 PCR 法检测多氯联苯环境激素第152-177页
   ·引言第152页
   ·实验仪器与试剂第152-153页
     ·实验仪器第152-153页
     ·实验试剂第153页
   ·固相抗体竞争 Rt-IPCR 法检测多氯联苯方法建立与优化第153-156页
     ·三种 PCBs 生物素化半抗原的制备与鉴定第153-154页
     ·固相抗体竞争 rt-IPCR 法检测 PCBs 方法的建立第154-155页
     ·固相抗体竞争 rt-IPCR 法检测多氯联苯分析方法条件优化第155页
     ·固相抗体竞争 rt-IPCR 分析方法特异性评价第155页
     ·方法准确性—样品测定和加标回收实验第155-156页
   ·结果与讨论第156-175页
     ·三种多氯联苯生物素化半抗原的紫外吸收鉴定第156-158页
     ·固相竞争 rt-IPCR 分析方法的优化第158-160页
     ·固相抗体竞争 rt-IPCR 方案对 PCB12 的检测第160-165页
     ·固相抗体竞争 rt-IPCR 法对 PCB37 的检测第165-170页
     ·固相抗体竞争 rt-IPCR 法对 PCB77 的检测第170-175页
   ·固相抗体竞争 Rt-IPCR 法与 GC/MS 法测定多氯联苯的比较第175-176页
   ·本章小结第176-177页
第八章 总结与展望第177-183页
   ·总结第177-181页
   ·本课题存在的问题与研究前景第181-183页
参考文献第183-201页
附录1. 部分多氯联苯 IUPAC 命名法第201-202页
附录2. 实验中常用试剂和缓冲溶液配制第202-203页
攻读博士学位期间申请专利以及已发表和待发表的文章第203-204页
致谢第204页

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