致谢 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-10页 |
1 文献综述 | 第10-23页 |
·甘薯病毒病发生概况 | 第10-11页 |
·甘薯病毒病害( Sweet potato virus disease, SPVD) 研究进展 | 第11-15页 |
·SPVD 的发生概况 | 第11页 |
·SPVD 的侵染机理 | 第11页 |
·SPVD 的病原 | 第11-14页 |
·甘薯羽状斑驳病毒 (SPFMV ) | 第11-13页 |
·甘薯褪绿矮缩病毒(SPCSV) | 第13-14页 |
·SPVD 的发生规律和防治 | 第14页 |
·抗性育种 | 第14-15页 |
·基因工程改造的甘薯抗性品种 | 第15页 |
·甘薯病毒的检测方法 | 第15-23页 |
·症状学诊断法 | 第15页 |
·生物学检测法 | 第15-16页 |
·电子显微镜检测法 | 第16页 |
·血清学方法 | 第16-18页 |
·酶联免疫吸附法(ELISA) | 第17页 |
·斑点酶联免疫吸附法 (Dot-ELISA) | 第17-18页 |
·免疫电镜技术(ISEM) | 第18页 |
·核酸杂交检测技术(NASH) | 第18-19页 |
·滚环扩增技术(RCA ) | 第19页 |
·siRNA 深度测序技术 | 第19-20页 |
·PCR 检测技术 | 第20-23页 |
·常规 PCR | 第20页 |
·实时荧光定量 PCR(qPCR) | 第20-21页 |
·巢式 PCR | 第21页 |
·多重 PCR 检测技术 | 第21-23页 |
2 引言 | 第23-24页 |
3 材料与方法 | 第24-33页 |
·材料 | 第24-25页 |
·病毒材料 | 第24页 |
·感病甘薯材料 | 第24页 |
·带毒烟粉虱 | 第24页 |
·疑似 SPCSV 甘薯样品的采集 | 第24页 |
·质粒和菌株 | 第24页 |
·引物 | 第24页 |
·酶和试剂 | 第24-25页 |
·方法 | 第25-33页 |
·基本的分子生物学方法 | 第25-29页 |
·植物总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
·烟粉虱中总 RNA 的提取 | 第26页 |
·RT-PCR 检测 | 第26-27页 |
·目的片段的回收与纯化 | 第27页 |
·目的片段与载体的连接 | 第27-28页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
·转化大肠杆菌 | 第28页 |
·质粒提取 | 第28-29页 |
·重组质粒的鉴定 | 第29页 |
·PCR 产物序列测定 | 第29页 |
·SPVD 多重 RT-PCR 检测方法的建立 | 第29-31页 |
·单一 RT-PCR 反应体系 | 第29-30页 |
·多重 RT-PCR 反应条件的筛选 | 第30页 |
·多重 RT-PCR 的特异性试验 | 第30页 |
·多重 RT-PCR 的灵敏性试验 | 第30-31页 |
·多重 RT-PCR 的初步应用 | 第31页 |
·烟粉虱中 SPCSV 检测方法的建立 | 第31-32页 |
·NCM-ELISA 检测 | 第31页 |
·RT-PCR 检测 | 第31页 |
·半巢式 RT-PCR 检测方法的建立 | 第31-32页 |
·我国甘薯退绿矮化病毒(SPCSV)CP基因及RNA 13ˊ端序列的分子变异研究 | 第32-33页 |
·病叶甘薯中总 RNA 提取 | 第32页 |
·RT-PCR | 第32页 |
·PCR 产物的克隆和序列测定 | 第32页 |
·SPCSVCP 基因及 RNA 13ˊ端基因序列生物学分析 | 第32-33页 |
4 结果与分析 | 第33-44页 |
·S PVD 的多重 RT-PCR 检测 | 第33-38页 |
·多重 RT-PCR 反应条件的优化 | 第33-35页 |
·多重 RT-PCR 单一 RT-PCR 扩增效果的比较 | 第35页 |
·待检基因的体外转录及其产物的纯化与定量 | 第35页 |
·多重 RT-PCR 的特异性分析 | 第35-36页 |
·单重与多重 RT-PCR 的灵敏性分析 | 第36页 |
·多重 RT-PCR 扩增产物的鉴定 | 第36-37页 |
·甘薯病毒病害 SPVD 多重 RT-PCR 检测方法的应用 | 第37-38页 |
·烟粉虱体内甘薯褪绿矮化病毒( SPCSV)的快速检测技术 | 第38-41页 |
·NCM -ELISA 检测烟粉虱体内的 SPCSV | 第38-39页 |
·RT-PCR 检测烟粉虱体内的 SPCSV | 第39-40页 |
·半巢式 RT-PCR 检测烟粉虱体内的 SPCSV | 第40页 |
·RT-PCR 和半巢式 RT-PCR 产物的序列测定 | 第40页 |
·RT-PCR 和半巢式 RT-PCR 检测 SPCSV 的灵敏性比较 | 第40-41页 |
·我国 SPCSV 的分子变异研究 | 第41-44页 |
·SPCSV 不同分离物 CP 基因的 PCR 扩增和序列测定 | 第41页 |
·我国 SPCSVCP 基因的分子变异分析 | 第41-42页 |
·SPCSVRNA 13 ˊ端序列的 PCR 扩增和序列测定 | 第42-43页 |
·我国 SPCSV 的 RNA 13ˊ端序列的分子变异分析 | 第43-44页 |
5 讨论 | 第44-46页 |
·SPVD 的多重 RT-PCR 检测技术 | 第44-45页 |
·烟粉虱体内甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)的快速检测技术 | 第45页 |
·我国甘薯上 SPCSV 的分子变异研究 | 第45-46页 |
6 结论 | 第46-48页 |
参考文献 | 第48-57页 |
ABSTRACT | 第57-58页 |