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甘薯病毒病害(SPVD)病原的检测方法和分子变异研究

致谢第1-9页
摘要第9-10页
1 文献综述第10-23页
   ·甘薯病毒病发生概况第10-11页
   ·甘薯病毒病害( Sweet potato virus disease, SPVD) 研究进展第11-15页
     ·SPVD 的发生概况第11页
     ·SPVD 的侵染机理第11页
     ·SPVD 的病原第11-14页
       ·甘薯羽状斑驳病毒 (SPFMV )第11-13页
       ·甘薯褪绿矮缩病毒(SPCSV)第13-14页
     ·SPVD 的发生规律和防治第14页
     ·抗性育种第14-15页
     ·基因工程改造的甘薯抗性品种第15页
   ·甘薯病毒的检测方法第15-23页
     ·症状学诊断法第15页
     ·生物学检测法第15-16页
     ·电子显微镜检测法第16页
     ·血清学方法第16-18页
       ·酶联免疫吸附法(ELISA)第17页
       ·斑点酶联免疫吸附法 (Dot-ELISA)第17-18页
       ·免疫电镜技术(ISEM)第18页
     ·核酸杂交检测技术(NASH)第18-19页
     ·滚环扩增技术(RCA )第19页
     ·siRNA 深度测序技术第19-20页
     ·PCR 检测技术第20-23页
       ·常规 PCR第20页
       ·实时荧光定量 PCR(qPCR)第20-21页
       ·巢式 PCR第21页
       ·多重 PCR 检测技术第21-23页
2 引言第23-24页
3 材料与方法第24-33页
   ·材料第24-25页
     ·病毒材料第24页
       ·感病甘薯材料第24页
       ·带毒烟粉虱第24页
       ·疑似 SPCSV 甘薯样品的采集第24页
     ·质粒和菌株第24页
     ·引物第24页
     ·酶和试剂第24-25页
   ·方法第25-33页
     ·基本的分子生物学方法第25-29页
       ·植物总 RNA 的提取第25-26页
       ·烟粉虱中总 RNA 的提取第26页
       ·RT-PCR 检测第26-27页
       ·目的片段的回收与纯化第27页
       ·目的片段与载体的连接第27-28页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第28页
       ·转化大肠杆菌第28页
       ·质粒提取第28-29页
       ·重组质粒的鉴定第29页
       ·PCR 产物序列测定第29页
     ·SPVD 多重 RT-PCR 检测方法的建立第29-31页
       ·单一 RT-PCR 反应体系第29-30页
       ·多重 RT-PCR 反应条件的筛选第30页
       ·多重 RT-PCR 的特异性试验第30页
       ·多重 RT-PCR 的灵敏性试验第30-31页
       ·多重 RT-PCR 的初步应用第31页
     ·烟粉虱中 SPCSV 检测方法的建立第31-32页
       ·NCM-ELISA 检测第31页
       ·RT-PCR 检测第31页
       ·半巢式 RT-PCR 检测方法的建立第31-32页
     ·我国甘薯退绿矮化病毒(SPCSV)CP基因及RNA 13ˊ端序列的分子变异研究第32-33页
       ·病叶甘薯中总 RNA 提取第32页
       ·RT-PCR第32页
       ·PCR 产物的克隆和序列测定第32页
       ·SPCSVCP 基因及 RNA 13ˊ端基因序列生物学分析第32-33页
4 结果与分析第33-44页
   ·S PVD 的多重 RT-PCR 检测第33-38页
     ·多重 RT-PCR 反应条件的优化第33-35页
     ·多重 RT-PCR 单一 RT-PCR 扩增效果的比较第35页
     ·待检基因的体外转录及其产物的纯化与定量第35页
     ·多重 RT-PCR 的特异性分析第35-36页
     ·单重与多重 RT-PCR 的灵敏性分析第36页
     ·多重 RT-PCR 扩增产物的鉴定第36-37页
     ·甘薯病毒病害 SPVD 多重 RT-PCR 检测方法的应用第37-38页
   ·烟粉虱体内甘薯褪绿矮化病毒( SPCSV)的快速检测技术第38-41页
     ·NCM -ELISA 检测烟粉虱体内的 SPCSV第38-39页
     ·RT-PCR 检测烟粉虱体内的 SPCSV第39-40页
     ·半巢式 RT-PCR 检测烟粉虱体内的 SPCSV第40页
     ·RT-PCR 和半巢式 RT-PCR 产物的序列测定第40页
     ·RT-PCR 和半巢式 RT-PCR 检测 SPCSV 的灵敏性比较第40-41页
   ·我国 SPCSV 的分子变异研究第41-44页
     ·SPCSV 不同分离物 CP 基因的 PCR 扩增和序列测定第41页
     ·我国 SPCSVCP 基因的分子变异分析第41-42页
     ·SPCSVRNA 13 ˊ端序列的 PCR 扩增和序列测定第42-43页
     ·我国 SPCSV 的 RNA 13ˊ端序列的分子变异分析第43-44页
5 讨论第44-46页
   ·SPVD 的多重 RT-PCR 检测技术第44-45页
   ·烟粉虱体内甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)的快速检测技术第45页
   ·我国甘薯上 SPCSV 的分子变异研究第45-46页
6 结论第46-48页
参考文献第48-57页
ABSTRACT第57-58页

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