| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-31页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的研究进展 | 第11-23页 |
| ·PRRSV 的病原学研究 | 第11-13页 |
| ·PRRS 的分子生物学研究 | 第13-19页 |
| ·PRRS 的流行病学研究 | 第19-20页 |
| ·PRRS 疫苗研究 | 第20-23页 |
| ·沙门氏菌减毒及其作为疫苗活载体的研究进展 | 第23-31页 |
| ·沙门氏菌减毒研究进展 | 第23-25页 |
| ·沙门氏菌疫苗活载体的研究进展 | 第25-31页 |
| 第2章 豫西地区 PRRSV 分子流行病学调查 | 第31-46页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·病料采集 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·工具酶及试剂 | 第32页 |
| ·主要培养基及抗生素的配制 | 第32-33页 |
| ·主要试剂的配制 | 第33页 |
| ·主要实验器材 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·病料的处理 | 第34页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第34页 |
| ·RT-PCR | 第34-36页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第36页 |
| ·PCR 产物与 pMD18-T 载体的连接与转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-42页 |
| ·ORF5 基因的 RT-PCR | 第38-39页 |
| ·重组 ORF5 质粒酶切鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·ORF5 基因核酸序列分析 | 第40页 |
| ·ORF5 基因遗传进化分析 | 第40-41页 |
| ·ORF5 基因编码氨基酸序列分析 | 第41页 |
| ·部分 Nsp2 基因序列扩增测序结果 | 第41-42页 |
| ·重组 Nsp2 质粒酶切鉴定结果 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·展望 | 第44-46页 |
| 第3章 猪霍乱沙门氏菌 C78-1 株△crp△asd 缺失株的构建及鉴定 | 第46-64页 |
| ·材料 | 第46-50页 |
| ·质粒、菌株及培养条件 | 第46-48页 |
| ·主要试剂及培养 | 第48页 |
| ·培养基及抗生素 | 第48-49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49页 |
| ·主要实验器材 | 第49-50页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-54页 |
| ·菌株的活化培养 | 第50-51页 |
| ·细菌基因组 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·PCR 产物的和酶切产物的回收与纯化 | 第51页 |
| ·目的片段的连接及其产物的转化 | 第51-52页 |
| ·质粒的制备 | 第52页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第52页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌 C78-1 株 asd 基因的扩增与鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组自杀性质粒 pRE asd 的构建 | 第53页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌 C78-1 株 crp asdC78-1 的构建与鉴定 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-61页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌 C78-1 株 asd 基因的克隆与序列分析 | 第54-55页 |
| ·重组自杀性质粒 pREΔasd 的构建 | 第55-60页 |
| ·接合转移及缺失菌株 crp asdC78-1 的筛选 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| ·重组自杀性质粒的特性 | 第61-62页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌 C78-1 株 crp asd 缺失株平衡致死系统 | 第62-64页 |
| 第4章 猪霍乱沙门氏菌 C78-1 株△crp△asd 缺失株生物学特性研究 | 第64-75页 |
| ·材料 | 第64-66页 |
| ·菌株、试剂及培养基 | 第64页 |
| ·实验动物 | 第64-65页 |
| ·主要培养基及试剂的配制 | 第65-66页 |
| ·主要实验器材 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-68页 |
| ·沙门氏菌的 PCR 鉴定 | 第66-67页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 表型鉴定 | 第67页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 遗传稳定性 | 第67页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 生长特性 | 第67页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 的毒力测定 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-72页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 表型鉴定 | 第68-70页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 遗传稳定性 | 第70页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 生长特性 | 第70-71页 |
| ·缺失菌株Δcrp asdC78-1 的毒力测定 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| ·crp 基因缺失的意义 | 第72-73页 |
| ·基因缺失对菌株的影响 | 第73-75页 |
| 第5章 重组 PRRSV ORF5 减毒猪霍乱沙门氏菌的构建及鉴定 | 第75-86页 |
| ·材料 | 第75-77页 |
| ·菌株、载体及质粒 | 第75页 |
| ·酶及生化试剂 | 第75页 |
| ·相关试剂配制 | 第75-76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76-77页 |
| ·方法 | 第77-80页 |
| ·沙门氏菌电转化感受态的制备 | 第77页 |
| ·载体的构建 | 第77页 |
| ·沙门氏菌的电转化 | 第77-78页 |
| ·重组菌 crp asd C78-1(PYA-dORF5)的鉴定 | 第78页 |
| ·dORF5 基因在重组菌 crp asd C78-1(PYA-dORF5)中的稳定性检测 | 第78页 |
| ·重组菌 crp asd C78-1(PYA-dORF5)的分泌表达 | 第78-79页 |
| ·Western Blot 检测 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-84页 |
| ·质粒 PYA3493 的相关酶切鉴定 | 第80页 |
| ·重组菌 crp asd C78-1(PYA-dORF5)的鉴定 | 第80-82页 |
| ·dORF5 基因在重组菌 crp asd C78-1(PYA-dORF5)的稳定性鉴定 | 第82页 |
| ·重组菌 crp asd C78-1(PYA-dORF5)的分泌表达 | 第82-83页 |
| ·Western blot 检测 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| 第6章 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第96-97页 |
