| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-32页 |
| ·实验材料 | 第13-15页 |
| ·试剂与培养基 | 第13页 |
| ·质粒与菌株 | 第13页 |
| ·抗体 | 第13页 |
| ·检测试剂盒 | 第13页 |
| ·引物 | 第13-14页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第14页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-32页 |
| ·实验基本思路示意图 | 第15-16页 |
| ·目的基因克隆载体和表达载体的构建 | 第16-22页 |
| ·PCR 反应 | 第16页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第16-17页 |
| ·PCR 产物与克隆载体 pMD 18-T Vector 连接 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌 DH5α 和 BL21(DE3)感受态的制备 | 第18页 |
| ·重组体的转化及重组克隆的筛选与鉴定 | 第18-19页 |
| ·重组克隆载体和表达载体的酶切及回收 | 第19页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第19-21页 |
| ·抽提质粒并转化至表达菌 BL21(DE3) | 第21-22页 |
| ·重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第22-28页 |
| ·诱导蛋白表达，分析蛋白表达条件和表达情况 | 第22-23页 |
| ·包涵体蛋白纯化（rCRT/N domain） | 第23-24页 |
| ·镍柱纯化 His 标签蛋白（rCRT/120-250、rCRT/120-308） | 第24-26页 |
| ·Glutathione Sepharose 4B 纯化 GST 标签蛋白（rCRT/251-360、rCRT/C domain、GST） | 第26-27页 |
| ·Polymyxin B-Agarose 去除重组蛋白内毒素 | 第27-28页 |
| ·Western blot 分析 | 第28页 |
| ·重组蛋白多聚体结构分析 | 第28页 |
| ·MTT 分析 | 第28-29页 |
| ·NO 分析 | 第29页 |
| ·抗体夹心 ELISAs 检测细胞上清中的 IL-6（C57BL/6 小鼠脾细胞）和 TNF-α（C57BL/6 小鼠腹腔巨噬细胞） | 第29-30页 |
| ·动物免疫和血清采集 | 第30页 |
| ·ELISAs 检测重组蛋白免疫动物的血清滴度 | 第30-31页 |
| ·统计学分析 | 第31-32页 |
| 第三章 重组 CRT 片段的表达、纯化及 Wstern blot 分析 | 第32-39页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的原核表达与纯化 | 第33-36页 |
| ·rCRT/N domian 的表达和纯化 | 第33-34页 |
| ·其他重组蛋白的表达和纯化 | 第34-36页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白多聚体结构的分析 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第四章 重组 CRT 片段的免疫刺激活性研究 | 第39-44页 |
| ·重组蛋白刺激小鼠脾细胞增殖试验 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白刺激小鼠脾细胞分泌 IL-6 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌 NO | 第41-42页 |
| ·重组蛋白刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌 TNF-α | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第五章 重组 CRT 片段免疫原性研究 | 第44-48页 |
| ·重组蛋白免疫原性分析 | 第44-46页 |
| ·重组 CRT 片段免疫鼠得到的血清抗体对 FL-CRT 识别分析 | 第46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第六章 讨论 | 第48-52页 |
| ·重组蛋白的原核表达与纯化 | 第48页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·包涵体蛋白复性的检测 | 第49-50页 |
| ·CRT 的稳定性与 PH 的关系 | 第50页 |
| ·CRT 的免疫生物学功能与蛋白多聚体结构的关系 | 第50-51页 |
| ·总结 | 第51-52页 |
| 文献综述 | 第52-59页 |
| 结语 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 英文缩写词表 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 简历 | 第69-70页 |
