| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 英文缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 核黄素结合蛋白的发现及分离纯化方法 | 第15-17页 |
| ·核黄素结合蛋白的发现 | 第15页 |
| ·核黄素结合蛋白分离纯化方法 | 第15-17页 |
| ·离子交换法 | 第15-16页 |
| ·亲和层析法 | 第16-17页 |
| 2 核黄素结合蛋白理化性质、组成及结构 | 第17-21页 |
| ·化特性 | 第17页 |
| ·一级结构 | 第17-19页 |
| ·高级结构 | 第19页 |
| ·蛋清、蛋黄和血清中核黄素结合蛋白结构的比较 | 第19-21页 |
| 3 核黄素结合蛋白的生物活性 | 第21-24页 |
| ·免疫原性 | 第21页 |
| ·维持胚胎的正常发育 | 第21-22页 |
| ·核黄素结合蛋白与疾病 | 第22-23页 |
| ·作为CE和HPLC的手性选择物 | 第23页 |
| ·作为甜味和苦味物质的抑制剂 | 第23-24页 |
| ·抗菌特性 | 第24页 |
| 4 核黄素结合蛋白与小分子配基的结合特性 | 第24-27页 |
| ·核黄素结合蛋白与核黄素结合 | 第24-26页 |
| ·核黄素结合蛋白与核黄素结合量 | 第24-25页 |
| ·核黄素结合蛋白与核黄素结合的影响因素 | 第25页 |
| ·核黄素结合蛋白与核黄素的结合位点 | 第25-26页 |
| ·核黄素结合蛋白与铜离子的结合 | 第26-27页 |
| 5 本课题研究的意义与主要研究内容 | 第27-29页 |
| ·研究意义 | 第27页 |
| ·主要研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 核黄素结合蛋白分离纯化 | 第29-43页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·材料和试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·硫酸铵盐析粗提 | 第31页 |
| ·硫酸铵浓度对蛋清RBP粗提的影响 | 第31页 |
| ·pH值对硫酸铵盐析的影响 | 第31页 |
| ·离子交换纯化 | 第31-32页 |
| ·缓冲液pH | 第32页 |
| ·缓冲液浓度 | 第32页 |
| ·NaCl洗脱液浓度 | 第32页 |
| ·上样量 | 第32页 |
| ·产品鉴定与纯度、活性测定 | 第32-33页 |
| ·十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第32页 |
| ·紫外可见光谱 | 第32页 |
| ·高效液相色谱(HPLC) | 第32-33页 |
| ·荧光分析 | 第33页 |
| ·蛋白质回收率计算 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-42页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第33-35页 |
| ·硫酸铵浓度对蛋白质粗提的影响 | 第33-34页 |
| ·pH对硫酸铵盐析效果的影响 | 第34-35页 |
| ·硫酸铵盐析样品SDS-PAGE | 第35页 |
| ·离子交换纯化条件确定 | 第35-39页 |
| ·缓冲液pH值确定 | 第35-36页 |
| ·缓冲液浓度确定 | 第36-38页 |
| ·NaCl洗脱浓度确定 | 第38页 |
| ·上样量确定 | 第38-39页 |
| ·产品鉴定与纯度、活性测定 | 第39-41页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第39页 |
| ·核黄素结合蛋白紫外可见光谱 | 第39-40页 |
| ·高效液相色谱测定产品纯度 | 第40-41页 |
| ·荧光猝灭法测定产品活性 | 第41页 |
| ·蛋白质回收率 | 第41-42页 |
| 3 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 核黄素结合蛋白与核黄素结合 | 第43-55页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·原料 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器和设备 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·荧光光谱测定 | 第45页 |
| ·紫外可见光谱测定 | 第45页 |
| ·红外光谱测定及谱图处理 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-54页 |
| ·核黄素与Apo-RBP结合的荧光光谱及荧光猝灭机理 | 第46-47页 |
| ·核黄素与Apo-RBP的结合常数及结合位点数 | 第47-48页 |
| ·核黄素与Apo-RBP之间作用力类型的判断 | 第48-49页 |
| ·核黄素与Apo-RBP之间的能量转移 | 第49-50页 |
| ·核黄素对Apo-RBP构象的影响 | 第50-53页 |
| ·UV-Vis光谱 | 第50页 |
| ·同步荧光光谱 | 第50-51页 |
| ·核黄素对Apo-RBP傅立叶变换红外光谱的影响 | 第51-53页 |
| ·金属离子对核黄素与Apo-RBP结合之间的影响 | 第53-54页 |
| 3 小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 光谱法研究铜离子与核黄素结合蛋白的结合 | 第55-69页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·原料 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·主要仪器和设备 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-57页 |
| ·荧光光谱的测定 | 第56-57页 |
| ·Cu(Ⅱ)对Apo-RBP表面疏水性的影响 | 第57页 |
| ·紫外可见吸收光谱的测定 | 第57页 |
| ·傅立叶变换红外光谱的测定 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-67页 |
| ·Cu(Ⅱ)对Apo-RBP荧光的猝灭研究 | 第57-58页 |
| ·Cu(Ⅱ)对Apo-RBP荧光猝灭机理研究 | 第58-59页 |
| ·不同条件对Cu(Ⅱ)与Apo-RBP结合的影响 | 第59-63页 |
| ·温度对Cu(Ⅱ)与Apo-RBP结合的影响 | 第59-60页 |
| ·不同pH对Cu(Ⅱ)与Apo-RBP结合的影响 | 第60-61页 |
| ·不同核黄素浓度对Cu(Ⅱ)与Apo-RBP结合的影响 | 第61页 |
| ·EDTA对Cu(Ⅱ)猝灭Apo-RBP荧光的影响 | 第61-62页 |
| ·NaCl浓度对Cu(Ⅱ)与Apo-RBP结合的影响 | 第62-63页 |
| ·Cu(Ⅱ)的结合对Apo-RBP结构的影响 | 第63-67页 |
| ·Cu(Ⅱ)对Apo-RBP紫外吸收光谱的影响 | 第63页 |
| ·Cu(Ⅱ)对Apo-RBP同步荧光光谱的影响 | 第63-64页 |
| ·ANS研究Cu(Ⅱ)对Apo-RBP构象的转变 | 第64-65页 |
| ·FT-IR研究Cu(Ⅱ)对Apo-RBP构象的影响 | 第65-67页 |
| 3 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 电化学法研究铜离子与核黄素结合蛋白的结合 | 第69-77页 |
| 1 材料与方法 | 第69-72页 |
| ·材料 | 第69-70页 |
| ·原料 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69-70页 |
| ·主要仪器和设备 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-72页 |
| ·电极预处理 | 第70页 |
| ·电化学测定条件 | 第70页 |
| ·不同pH条件下Cu(Ⅱ)的电化学响应 | 第70-71页 |
| ·Apo-RBP的电化学性质 | 第71页 |
| ·循环伏安法研究Apo-RBP与Cu(Ⅱ)的相互作用 | 第71页 |
| ·扫描速度对Cu(Ⅱ)-ApoRBP的循环伏安特性的影响 | 第71页 |
| ·微分脉冲伏安法研究Apo-RBP与Cu(Ⅱ)的相互作用 | 第71-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-76页 |
| ·不同pH条件下Cu(Ⅱ)的电化学响应 | 第72-73页 |
| ·Apo-RBP的循环伏安性质 | 第73页 |
| ·Cu(Ⅱ)与Apo-RBP及其复合物循环伏安特性 | 第73-74页 |
| ·不同扫描速度下Cu(Ⅱ)-ApoRBP复合物循环伏安图 | 第74-75页 |
| ·微分脉冲伏安法研究Apo-RBP对Cu(Ⅱ)的相互作用 | 第75-76页 |
| 3 小结与讨论 | 第76-77页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第77-79页 |
| 1 结论 | 第77-78页 |
| 2 创新点 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附录：研究生期间公开发表论文 | 第89页 |
