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生长因子在肌腱损伤愈合早期中的表达变化及转基因治疗肌腱损伤的初步研究

中文摘要第1-7页
Abstract第7-13页
研究背景第13-19页
 参考文献第16-19页
第一部分 生长因子在肌腱损伤愈合早期中的表达变化第19-39页
 1 材料与方法第19-25页
   ·实验动物第19-20页
   ·肌腱手术第20-21页
   ·肌腱标本获取第21页
   ·实时PCR 方法检测生长因子mRNA 表达变化第21-24页
   ·IGF-1、TGF-β和bFGF 的免疫组化染色第24-25页
   ·肌腱的HE 染色第25页
   ·生长因子表达水平的统计学分析第25页
 2 结果第25-33页
   ·内参GAPDH 普通PCR 结果(示意)第25-26页
   ·实时PCR 扩增曲线、熔解曲线和PCR 产物电泳图随机选取示意第26页
   ·在同一时间点各生长因子的mRNA 水平在肌腱愈合早期的表达第26-28页
   ·生长因子在肌腱愈合早期的不同时间点表达第28-30页
   ·生长因子免疫组化染色第30-32页
   ·肌腱在损伤后不同时间点的炎症反应第32-33页
 3 讨论第33-35页
 参考文献第35-39页
第二部分 注射不同载体转基因至损伤肌腱的效率、分布和组织反应第39-49页
 1 材料与方法第39-41页
   ·转基因载体及相关试剂第39页
   ·实验动物及分组第39-40页
   ·肌腱标本的获取第40页
   ·转基因效率的荧光显微镜观察第40-41页
   ·转基因载体引起肌腱组织反应观察第41页
   ·肌腱组织反应细胞密度的统计学分析第41页
 2 结果第41-45页
   ·四种基因治疗方法在损伤肌腱中的转基因效率第41-43页
   ·四种基因治疗方法在损伤肌腱中引起的组织反应第43-45页
   ·肌腱组织反应细胞密度分析第45页
 3 讨论第45-47页
 参考文献第47-49页
第三部分 不同载体在肌腱中转基因效率及 AAV2 介导 bFGF 基因在愈合肌腱中表达的研究第49-57页
 1 材料与方法第49-52页
   ·载体及相关试剂第49页
   ·实验动物第49-50页
   ·动物手术及分组第50页
   ·肌腱标本的获取第50-51页
   ·GFP 荧光显微镜观察第51页
   ·bFGF 免疫组化染色第51-52页
 2 结果第52-54页
   ·荧光显微镜观测肌腱细胞表达EGFP第52-53页
   ·鸡趾深屈肌腱免疫组织化学染色第53-54页
 3 讨论第54-55页
 参考文献第55-57页
第四部分 基因治疗导入微小RNA沉默肌腱细胞转化生长因子基因的体外研究和体内应用第57-77页
 1 材料与方法第57-68页
   ·miRNA TGF β1 干扰表达载体的设计及干扰质粒的制备第57-64页
   ·肌腱细胞原代培养第64-65页
   ·基因转染第65页
   ·实时PCR 检测肌腱细胞TGF β1,I 、Ш型胶原和CTGF 基因表达第65-67页
   ·导入miRNAs 至体内损伤肌腱及对损伤肌腱基因表达作用的体内实验第67页
   ·TGF β1、I 型胶原、Ш型胶原和CTGF 基因表达的统计学分析第67-68页
 2 结果第68-72页
   ·导入miRNA 沉默肌腱细胞TGF β1 基因效果及对I 、Ш型胶原和CTGF 基因表达影响第68-71页
   ·导入miRNA 沉默损伤肌腱TGF β1 基因效果及对I 、Ш型胶原和CTGF 基因表达影响第71-72页
 3 讨论第72-75页
 参考文献第75-77页
结语第77-78页
综述:肌腱损伤与修复第78-90页
本课题的基金资助第90-91页
博士研究生期间发表和待发表的论文及学术交流第91-93页
附录第93-100页
致谢第100页

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