| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 蛋白质的结构、功能与动力学之间的关系 | 第14-32页 |
| ·概述 | 第14页 |
| ·NMR方法研究蛋白质的动力学 | 第14-26页 |
| ·核磁共振基本原理和三个可观测量 | 第15-16页 |
| ·化学交换 | 第16-17页 |
| ·Real-time(RT)NMR(τ_(ex)>1 s；kex<1 s) | 第17-18页 |
| ·Exchange SpectroscopY(EXSY)(τ_(ex)≈10-5000 ms；kex≈0.2-100/s；慢交换kex<<△v) | 第18-19页 |
| ·线型分析(τex≈10-100 ms；kex≈10-100/s；中间速率慢交换kex≤△v) | 第19-20页 |
| ·Carr-Purcell Meiboom-Gill Relaxation Dispersion(CPMG RD)(τex≈0.3-10 ms；kex≈100-3000/s；中间速率的交换kex≈△v) | 第20-21页 |
| ·Rotating Frame Relaxation Dispersion(RF RD) (τex≈20-100 μs；kex≈10,000-50,000/s；中间速率快交换kex≥△v) | 第21-22页 |
| ·核自旋弛豫(NSR)直接检测ps-ns的蛋白质动力学 | 第22-24页 |
| ·残留的偶极耦合RDC(直接检测ps-ms的动力学) | 第24-25页 |
| ·顺磁弛豫增强(PRE)(τex≈10μs；kex≈100,000/s；快交换kex>>△v) | 第25-26页 |
| ·NMR研究蛋白质动力学的局限性 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-32页 |
| 第二章 非天然氨基酸标记研究蛋白质结构和动力学 | 第32-64页 |
| ·核磁可检测的非天然氨基酸的种类 | 第32-34页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·可用于核磁检测的非天然氨基酸 | 第32-34页 |
| ·液体~(19)F NMR在研究蛋白质结构和功能上的应用 | 第34-51页 |
| ·概述 | 第34页 |
| ·~(19)F核的特性以及在NMR研究中的优点 | 第34-35页 |
| ·用于~(19)F标记的化合物 | 第35-43页 |
| ·~(19)F非天然氨基酸标记的方法 | 第43-45页 |
| ·~(19)F非天然氨基酸标记的方法的举例 | 第45-51页 |
| ·固体~(19)F NMR在研究蛋白质、结构和功能上的应用 | 第51-57页 |
| ·~(19)F核的特性和结构计算上的策略 | 第51-52页 |
| ·固体~(19)F NMR的参数 | 第52-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 第三章 ~(19)F位点特异性氨基酸标记的方法分析蛋白质的动力学 | 第64-106页 |
| ·~(15)N/~(19)F tfmF标记以及SH3和DAGK简介 | 第64-67页 |
| ·实验材料与方法 | 第67-84页 |
| ·~(19)F位点特异性氨基酸标记的质粒 | 第67-68页 |
| ·引物设计 | 第68-69页 |
| ·PCR反应 | 第69-70页 |
| ·PCR产物的鉴定和回收 | 第70页 |
| ·载体的准备和双酶切反应 | 第70-71页 |
| ·DNA片段和载体的连接反应 | 第71-72页 |
| ·连接产物的转化 | 第72页 |
| ·菌落PCR和双酶切鉴定和测序 | 第72-73页 |
| ·表达条件的筛选 | 第73-75页 |
| ·TAG突变体的构建 | 第75-77页 |
| ·~(15)N标记三氟甲基苯丙氨酸(~(15)N-tfmF)的化学合成 | 第77-78页 |
| ·蛋白表达和位点特异性三氟甲基苯丙氨酸(~(15)N-tfmF)标记 | 第78-79页 |
| ·~(15)N/~(19)F tfmF标记蛋白的纯化 | 第79-80页 |
| ·用AKTAFPLC系统进一步纯化蛋白 | 第80-81页 |
| ·采集一维~(19)F谱 | 第81页 |
| ·侧链~(19)F弛豫时间的测定 | 第81-83页 |
| ·~(15)N滤过的一维~1H谱的采集和~(15)N T_1、T_2的测量 | 第83-84页 |
| ·实验结果与讨论 | 第84-102页 |
| ·~(15)N标记tfmF的化学合成 | 第84-85页 |
| ·野生型SH3-pBAD的表达 | 第85-87页 |
| ·选择TAG突变位点 | 第87-88页 |
| ·非天然氨基酸~(15)N/~(19)FtfmF的位点特异性标记 | 第88-89页 |
| ·~(15)N/~(19)F tfmF标记蛋白的分子筛纯化和核磁样品制备 | 第89-91页 |
| ·~(15)N/~(19)F tfmF位点特异性标记蛋白的核磁实验验证 | 第91-93页 |
| ·~(15)N/~(19)F tfmF位点特异性标记方法研究P868与SH3的结合 | 第93-98页 |
| ·~(15)N/~(19)F tfmF位点特异性标记方法对大分子量蛋白的弛豫分析 | 第98-100页 |
| ·位点特异性~(15N)/~(19)F tfmF标记对膜蛋白的化学位移和侧链弛豫分析 | 第100-102页 |
| ·本章小结 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 第四章 ~(19)F位点特异性氨基酸标记方法的其他应用 | 第106-132页 |
| ·前言 | 第106页 |
| ·~(19)F位点特异性氨基酸标记在膜蛋白溶剂暴露中的研究 | 第106-113页 |
| ·概述 | 第106-108页 |
| ·实验材料与方法 | 第108-109页 |
| ·实验结果与讨论 | 第109-113页 |
| ·~(19)F位点特异性弛豫增强实验在多结构域蛋白构象辨别上的应用 | 第113-121页 |
| ·概述 | 第113-116页 |
| ·实验材料与方法 | 第116-118页 |
| ·实验结果与讨论 | 第118-121页 |
| ·对大肠杆菌膜蛋白DAGK的原位固体~(19)F NMR研究 | 第121-128页 |
| ·概述 | 第121-122页 |
| ·实验材料与方法 | 第122-124页 |
| ·实验结果与讨论 | 第124-128页 |
| 参考文献 | 第128-132页 |
| 第五章 BK钾离子通道α亚基S0-S1 loop的液体核磁共振研究 | 第132-164页 |
| ·综述BK钾离子通道的结构和功能 | 第132-142页 |
| ·引言 | 第132页 |
| ·BK钾离子通道的分子特性 | 第132-134页 |
| ·BK钾离子通道的β亚基 | 第134-137页 |
| ·BK钾离子通道的功能 | 第137-139页 |
| ·BK钾离子通道的激活 | 第139-142页 |
| ·实验材料和实验方法 | 第142-148页 |
| ·文献调研 | 第142-143页 |
| ·生物信息学调研 | 第143页 |
| ·分子克隆 | 第143-144页 |
| ·膜蛋白表达 | 第144页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第144-146页 |
| ·去污剂的筛选和蛋白状态的检测 | 第146页 |
| ·同位素标记蛋白的表达与纯化 | 第146-147页 |
| ·核磁光谱的采集和数据处理 | 第147页 |
| ·主链弛豫分析 | 第147-148页 |
| ·Mg~(2+)滴定实验 | 第148页 |
| ·实验结果与讨论 | 第148-156页 |
| ·S0-S1 loop基因序列与引物设计 | 第148-151页 |
| ·S0-S1 loop的表达与纯化 | 第151-152页 |
| ·S0-S1 loop的主链归属和主链弛豫分析 | 第152-154页 |
| ·S0-S1 loop的结构计算 | 第154-155页 |
| ·Mg~(2+)滴定实验 | 第155-156页 |
| ·本章小结 | 第156-158页 |
| 参考文献 | 第158-164页 |
| 第六章 氨基酸标记研究蛋白质结构和功能的展望 | 第164-169页 |
| ·蛋白质的结构、功能和动力学的偶联 | 第164页 |
| ·如何解析In-situ状态下膜蛋白的结构 | 第164-167页 |
| ·液体核磁共振研究膜蛋白结构 | 第164-165页 |
| ·固体核磁共振在膜蛋白解析中的应用 | 第165页 |
| ·In situ研究膜蛋白结构进展 | 第165-166页 |
| ·In situ研究膜蛋白未来的发展 | 第166-167页 |
| 参考文献 | 第167-169页 |
| 附录 | 第169-171页 |
| 致谢 | 第171-172页 |
| 在读期间发表的学术论文和取得的其他研究成果 | 第172-173页 |
