| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 一 引言 | 第14-24页 |
| 1 稻瘟病和稻瘟病菌 | 第14-16页 |
| ·稻瘟病菌的侵染致病机制 | 第14-15页 |
| ·稻瘟病菌侵染相关的分泌蛋白的研究进展 | 第15-16页 |
| 2 真菌几丁质酶 | 第16-19页 |
| ·酵母中几丁质酶的研究进展 | 第17-18页 |
| ·丝状真菌中几丁质梅的研究进展 | 第18-19页 |
| ·稻瘟病菌中几丁质酶的研究进展 | 第19页 |
| 3 真菌功能基因组学的主要研究方法 | 第19-22页 |
| ·基因敲除技术 | 第20-21页 |
| ·基因敲除技术的优势和不足 | 第21页 |
| ·RNAi 干扰技术 | 第21-22页 |
| ·RNAi 的优势和不足 | 第22页 |
| 4 本研究的意义 | 第22-24页 |
| 二 材料与方法 | 第24-35页 |
| 1 实验材料 | 第24-25页 |
| ·供试菌株 | 第24页 |
| ·供试植物 | 第24页 |
| ·供试质粒 | 第24页 |
| ·生化试剂 | 第24页 |
| ·培养基（以下培养基成分含量均以一升计） | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-35页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因生物信息学浅析 | 第25页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因注释信息和氨基酸序列的获得 | 第25页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源蛋白的结构及其理化性质分析 | 第25页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源蛋白的氨基酸序列保守性分析 | 第25页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源蛋白氨基酸序列系统进化分析 | 第25页 |
| ·供试载体的构建 | 第25-30页 |
| ·PCR 反应体系 | 第27-28页 |
| ·酶切体系和连接反应体系 | 第28页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的转化及转化子验证 | 第29页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·稻瘟病菌原生质体制备和转化 | 第30-31页 |
| ·稻瘟病菌基因组 DNA 的粗提 | 第31页 |
| ·稻瘟病菌 RNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·RNA 的反转录 | 第32页 |
| ·荧光实时定量 PCR | 第32-33页 |
| ·转化子的验证 | 第33页 |
| ·稻瘟病菌的表型分析 | 第33-35页 |
| ·稻瘟病菌菌落生长速率测定 | 第33页 |
| ·稻瘟病菌分生孢子形态观察和产孢量统计 | 第33-34页 |
| ·稻瘟病菌分生孢子萌发率及附着胞形成率统计 | 第34页 |
| ·稻瘟病菌细胞壁敏感性分析 | 第34页 |
| ·大麦接种实验 | 第34页 |
| ·水稻致病性鉴定 | 第34-35页 |
| 三 结果与分析 | 第35-65页 |
| 1 稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因生物信息学浅析 | 第35-39页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因注释信息和氨基酸序列的获得 | 第35-36页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源蛋白的结构及理化性质分析 | 第36-37页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源蛋白的氨基酸序列保守性分析 | 第37-38页 |
| ·稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源蛋白序列的系统进化分析 | 第38-39页 |
| 2 稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因功能分析 | 第39-65页 |
| ·Class I（MGG_07927、MGG_00086、MGG_01247、MGG_05533） | 第39-43页 |
| ·Class I 基因 RNAi 突变体 Real-time PCR 验证 | 第39-40页 |
| ·Class I 基因 RNAi 突变体菌落形态观察 | 第40页 |
| ·Class I 基因 RNAi 突变体孢子形态观察 | 第40-41页 |
| ·Class I 基因 RNAi 突变体产孢量统计 | 第41页 |
| ·Class I 基因 RNAi 突变体分生孢子梗观察 | 第41-42页 |
| ·Class I 基因 RNAi 突变体分生孢子萌发率和附着胞形成率统计 | 第42页 |
| ·Class I 基因 RNAi 突变体致病性分析 | 第42-43页 |
| ·Class Ⅱ（MGG_11231 & MGG_08458）基因功能分析 | 第43-47页 |
| ·Class Ⅱ基因敲除突变体的获得与鉴定 | 第43-44页 |
| ·Class Ⅱ基因敲除突变体菌落形态观察 | 第44页 |
| ·Class Ⅱ基因敲除突变体孢子形态观察 | 第44-45页 |
| ·Class Ⅱ基因敲除突变体产孢量统计 | 第45-46页 |
| ·Class Ⅱ基因敲除突变体分生孢子萌发率和附着胞形成率统计 | 第46页 |
| ·Class Ⅱ基因敲除突变体致病性分析 | 第46-47页 |
| ·Class Ⅲ（MGG_04732）基因功能分析 | 第47-52页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体的获得与鉴定 | 第47页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体菌落形态观察 | 第47-48页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体孢子形态观察 | 第48-49页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体产孢量统计 | 第49页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体分生孢子梗观察 | 第49-50页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体分生孢子萌发率和附着胞形成率统计 | 第50页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体细胞壁敏感性分析 | 第50-51页 |
| ·Class Ⅲ基因敲除突变体致病性分析 | 第51-52页 |
| ·Class Ⅳ（MGG_06594&MGG_08054）基因功能分析 | 第52-57页 |
| ·Class Ⅳ基因敲除突变体的获得与鉴定 | 第52-53页 |
| ·Class Ⅳ基因敲除突变体菌落形态观察 | 第53-54页 |
| ·Class Ⅳ基因敲除突变体孢子形态观察 | 第54-55页 |
| ·Class Ⅳ基因敲除突变体产孢量统计 | 第55-56页 |
| ·Class Ⅳ基因敲除突变体分生孢子梗观察 | 第56页 |
| ·Class Ⅳ基因敲除突变体分生孢子萌发率和附着胞形成率统计 | 第56-57页 |
| ·Class Ⅳ基因敲除突变体致病性分析 | 第57页 |
| ·Class Ⅴ（MGG_04534&MGG_01336）基因功能分析 | 第57-65页 |
| ·Class Ⅴ基因敲除突变体的获得与鉴定 | 第58-59页 |
| ·Class Ⅴ基因敲除突变体菌落形态观察 | 第59-60页 |
| ·Class Ⅴ基因敲除突变体孢子形态观察 | 第60-61页 |
| ·Class Ⅴ基因敲除突变体产孢量统计 | 第61-62页 |
| ·Class Ⅴ基因敲除突变体分生孢子梗观察 | 第62-63页 |
| ·Class Ⅴ基因敲除变体分生孢子萌发率和附着胞形成率统计 | 第63页 |
| ·Class Ⅴ基因敲除突变体致病性分析 | 第63-65页 |
| 四 小结与讨论 | 第65-68页 |
| 1 稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因存在结构域的保守性 | 第65页 |
| 2 稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因与稻瘟病菌的菌丝生长和孢子发育相关 | 第65-66页 |
| 3 稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因与稻瘟病菌细胞壁完整性相关 | 第66页 |
| 4 稻瘟病菌中酵母 CTS2 同源基因可能参与稻瘟病菌与水稻之间的互作过程 | 第66页 |
| 5 稻瘟病菌假定的几丁质酶基因家族存在功能冗余现象 | 第66-68页 |
| 五展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录本研究所用引物 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
