| 正文目录 | 第1-11页 |
| 图片目录 | 第11-13页 |
| 表格目录 | 第13-14页 |
| 中文摘要 | 第14-17页 |
| 英文摘要 | 第17-20页 |
| 第一章 三七根的抑制消减文库构建 | 第20-46页 |
| 摘要 | 第21-22页 |
| 1 引言 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株和载体 | 第24-25页 |
| ·培养基及试剂 | 第25页 |
| ·引物和接头 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-34页 |
| ·总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·SMART cDNA的合成 | 第27页 |
| ·合成的cDNA的RsaⅠ消化 | 第27-28页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第28页 |
| ·Driver和Tester cDNA的制备 | 第28-29页 |
| ·消减杂交 | 第29页 |
| ·Nested PCR扩增消减杂交产物 | 第29-30页 |
| ·差减效率的检测 | 第30-31页 |
| ·三七根抑制消减文库的构建 | 第31-33页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·E.coli JM109 感受态细胞制备 | 第31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·三七根抑制消减文库cDNA片段大小检测 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA提取 | 第32-33页 |
| ·电泳检测 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-40页 |
| ·三七消减文库构建的策略 | 第34页 |
| ·RNA的分离纯化 | 第34-36页 |
| ·cDNA的SMART合成和RsaⅠ酶切 | 第36页 |
| ·抑制消减杂交PCR | 第36-37页 |
| ·消减效率的检测 | 第37-38页 |
| ·抑制消减文库的构建 | 第38-39页 |
| ·消减cDNA文库中cDNA片段大小的检测 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·高质量和足够量的RNA是构建高质量cDNA文库的前提 | 第40-41页 |
| ·构建三七根cDNA消减文库的重要性 | 第41页 |
| ·选择抑制消减杂交作为研究方法的依据 | 第41-43页 |
| 小结 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 第二章 三七差异表达基因的分析 | 第46-84页 |
| 摘要 | 第47-48页 |
| 1 引言 | 第48-50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-56页 |
| ·常用溶液的配制 | 第50-51页 |
| ·斑点杂交筛选 | 第51-54页 |
| ·尼龙膜的准备 | 第51页 |
| ·探针制备 | 第51-53页 |
| ·斑点杂交 | 第53-54页 |
| ·差异基因的测序和同源性分析 | 第54页 |
| ·RT-PCR分析 | 第54-56页 |
| ·RT-PCR反应体系和条件 | 第54-55页 |
| ·PCR扩增产物的定量检测 | 第55页 |
| ·引物的设计 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-76页 |
| ·差异表达基因筛选策略 | 第56页 |
| ·差异表达基因的斑点杂交 | 第56页 |
| ·差异基因的测序和同源性分析 | 第56-65页 |
| ·差异表达基因的RT—PCR分析 | 第65-66页 |
| ·差异表达基因与皂甙合成相关性分析 | 第66-74页 |
| ·皂甙合成关键酶基因分析 | 第66-69页 |
| ·与皂甙合成相关基因功能分析 | 第69-74页 |
| ·消减文库中部分基因分析 | 第74-76页 |
| ·末端尿苷酸转移酶 | 第74页 |
| ·果胶脂酶 | 第74页 |
| ·促分泌的过氧化物酶 | 第74-75页 |
| ·14-3-3蛋白 | 第75页 |
| ·二氢硫辛酰胺琥珀酰(基)转移酶 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| ·三七3年生根和1年生根cDNA中存在着差异表达的基因 | 第76-77页 |
| ·差异基因数量和皂甙合成的可能性分析 | 第77页 |
| ·三七3年生根成为主要的药用部位的分子生物学分析 | 第77-78页 |
| 小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 第三章 三七EST序列生物信息学分析 | 第84-114页 |
| 摘要 | 第85-86页 |
| 1 引言 | 第86-88页 |
| 2 材料与方法 | 第88-91页 |
| ·相关软件和程序的获取与安装 | 第88页 |
| ·EST序列的获取 | 第88页 |
| ·序列组装 | 第88-89页 |
| ·信号肽预测 | 第89-90页 |
| ·跨膜区预测 | 第90页 |
| ·亚细胞定位 | 第90页 |
| ·蛋白质结构功能域的分析 | 第90页 |
| ·功能位点分析 | 第90-91页 |
| 3 结果 | 第91-107页 |
| ·生物信息学分析策略 | 第91-92页 |
| ·序列组装 | 第92-93页 |
| ·蛋白质功能的分类 | 第93-94页 |
| ·蛋白质亚细胞定位分析 | 第94页 |
| ·信号肽分析 | 第94-100页 |
| ·跨膜结构的分析 | 第100-101页 |
| ·功能结构域的分析 | 第101页 |
| ·功能位点的分析 | 第101-107页 |
| 4 讨论 | 第107-109页 |
| ·EST序列组装的重要性 | 第107页 |
| ·EST结构的预测有助于新基因功能的分析 | 第107-108页 |
| ·EST结构的预测为基因提供与之相关的辅助信息 | 第108-109页 |
| 小结 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 第四章 三七鲨烯环氧酶基因的克隆与表达分析 | 第114-149页 |
| 摘要 | 第115-116页 |
| 1 引言 | 第116-118页 |
| 2 材料与方法 | 第118-123页 |
| ·实验材料与试剂 | 第118页 |
| ·实验方法 | 第118-123页 |
| ·三七根、茎、叶总RNA的分离与cDNA合成 | 第118页 |
| ·扩增三七鲨烯环氧酶基因编码区的引物设计 | 第118页 |
| ·PCR扩增三七鲨烯环氧酶基因 | 第118-119页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第119页 |
| ·DNA连接反应和大肠杆菌的转化 | 第119页 |
| ·质粒提取 | 第119页 |
| ·重组质粒的PCR和限制性内切酶酶切鉴定 | 第119页 |
| ·测序及序列数据分析 | 第119-120页 |
| ·荧光定量PCR | 第120-123页 |
| 3 结果 | 第123-141页 |
| ·三七鲨烯环氧酶基因克隆和时空表达策略 | 第123页 |
| ·RNA的提取和cDNA的合成 | 第123-125页 |
| ·三七鲨烯环氧酶cDNA的克隆与鉴定 | 第125-128页 |
| ·三七鲨烯环氧酶cDNA的PCR扩增 | 第125页 |
| ·三七鲨烯环氧酶cDNA克隆及鉴定 | 第125-126页 |
| ·三七鲨烯环氧酶cDNA的序列分析 | 第126-128页 |
| ·三七鲨烯环氧酶基因密码子偏爱性分析 | 第128-129页 |
| ·三七鲨烯环氧酶序列同源性分析 | 第129-133页 |
| ·三七鲨烯环氧酶信号肽和疏水性分析 | 第133-135页 |
| ·三七鲨烯环氧酶中重要基序分析 | 第135页 |
| ·三七鲨烯环氧酶基因进化树分析 | 第135-137页 |
| ·三七鲨烯环氧酶基因的表达 | 第137-141页 |
| ·常规PCR扩增 | 第137页 |
| ·标准品获取 | 第137页 |
| ·实时荧光定量PCR的评价和优化 | 第137-140页 |
| ·三七鲨烯环氧酶基因的时空表达和转录水平 | 第140-141页 |
| 4 讨论 | 第141-144页 |
| ·三七皂甙合成酶基因与人参的比较 | 第141-142页 |
| ·三七鲨烯环氧酶基因与其它物种比较 | 第142-143页 |
| ·三七鲨烯环氧酶基因时空表达的意义 | 第143-144页 |
| 小结 | 第144-145页 |
| 参考文献 | 第145-149页 |
| 文献综述 | 第149-184页 |
| 摘要 | 第150-152页 |
| 1 三七的生物学特性 | 第152-154页 |
| ·三七名称的考证 | 第152页 |
| ·三七植物学特征 | 第152-154页 |
| 2 三七的道地性 | 第154-159页 |
| ·道地药材生物学原理 | 第154-156页 |
| ·三七道地性分析 | 第156-159页 |
| ·三七道地性与其地质背景系统(GBS)、土壤理化状况的关系 | 第156-157页 |
| ·土壤pH | 第157页 |
| ·三七药材道地性与土壤微量元素的关系 | 第157-158页 |
| ·气象条件对三七药材道地性的影响 | 第158-159页 |
| 3 三七的药理研究进展 | 第159-164页 |
| ·心血管系统 | 第159-162页 |
| ·降低心肌耗氧量,改善心肌缺血 | 第159页 |
| ·抗心律失常 | 第159-160页 |
| ·降血脂,防止动脉粥样硬化 | 第160页 |
| ·降血压 | 第160页 |
| ·抗血栓、抗血小板聚集 | 第160-161页 |
| ·抗休克 | 第161页 |
| ·影响血液流变学特性 | 第161-162页 |
| ·抗氧化作用 | 第162页 |
| ·三七在肿瘤防治中的作用 | 第162-163页 |
| ·抗衰老作用 | 第163页 |
| ·对神经系统的影响 | 第163页 |
| ·镇静作用 | 第163页 |
| ·镇痛作用 | 第163页 |
| ·对免疫系统的影响 | 第163-164页 |
| 4 三七化学成分的研究进展 | 第164-173页 |
| ·三七的皂甙 | 第165-172页 |
| ·三七的皂甙成分 | 第165-168页 |
| ·三七各部位皂甙含量 | 第168-172页 |
| ·氨基酸成分 | 第172页 |
| ·黄酮类成分 | 第172页 |
| ·糖类成分 | 第172-173页 |
| ·有机酸 | 第173页 |
| ·无机成分 | 第173页 |
| 5 次生萜类生物合成的代谢途径 | 第173-183页 |
| ·萜类生物合成途径 | 第174-177页 |
| ·甲羟戊酸途径 | 第174页 |
| ·非甲羟戊酸途径 | 第174-177页 |
| ·生物合成的酶 | 第177-183页 |
| ·HMGR酶 | 第178页 |
| ·DXPS酶 | 第178-179页 |
| ·DXR酶 | 第179页 |
| ·烯丙基转移酶 | 第179-180页 |
| ·萜类合成酶 | 第180-183页 |
| 6 三七的分子生物学研究进展 | 第183-184页 |
| 展望 | 第184-194页 |
| 在读期间发表或被接收的论文 | 第194-195页 |
| 致谢 | 第195-196页 |
