| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 1 烟草花叶病毒的研究概况 | 第17-41页 |
| 1．1 病原学 | 第17-25页 |
| 1．1．1 TMV的粒体结构 | 第17页 |
| 1．1．2 TMV基因组结构 | 第17-18页 |
| 1．1．3 TMV基因组编码的蛋白及功能 | 第18-22页 |
| 1．1．3．1 126kDa、183kDa和50kDa蛋白 | 第18-19页 |
| 1．1．3．2 30kDa蛋白 | 第19-20页 |
| 1．1．3．3 17．6kDa蛋白 | 第20-22页 |
| 1．1．4 TMV的侵染和复制 | 第22-23页 |
| 1．1．5 TMV病毒粒体的自我组装 | 第23-24页 |
| 1．1．6 TMV株系 | 第24-25页 |
| 1．2 病害学 | 第25-39页 |
| 1．2．1 TMV引起的烟草花叶病的发生 | 第25-26页 |
| 1．2．2 TMV与症状的关系 | 第26-28页 |
| 1．2．2．1 系统侵染叶上症状的发展 | 第26-27页 |
| 1．2．2．2 成熟叶上症状的发展 | 第27-28页 |
| 1．2．3 病害的防治 | 第28-39页 |
| 1．2．3．1 TMV弱毒株的应用研究 | 第28-34页 |
| 1．2．3．2 抗TMV植物基因工程 | 第34-39页 |
| 1．3 存在问题及本实验的研究目标 | 第39-41页 |
| 2 烟草花叶病毒弱毒株的筛选及其生物学特性 | 第41-62页 |
| 2．1 材料与方法 | 第41-46页 |
| 2．1．1 供试材料 | 第41页 |
| 2．1．1．1 供试病毒毒源 | 第41页 |
| 2．1．1．2 供试烟草品种 | 第41页 |
| 2．1．1．3 TMV抗血清 | 第41页 |
| 2．1．1．4 供试鉴别寄主植物 | 第41页 |
| 2．1．2 实验方法 | 第41-46页 |
| 2．1．2．1 病毒的提纯 | 第42-43页 |
| 2．1．2．2 负染及电镜观察 | 第43页 |
| 2．1．2．3 免疫琼脂双扩散 | 第43页 |
| 2．1．2．4 间接ELISA法的建立 | 第43-44页 |
| 2．1．2．5 病汁液体外抗性的测定 | 第44页 |
| 2．1．2．6 诱变方法 | 第44-45页 |
| 2．1．2．7 单斑分离及检测 | 第45页 |
| 2．1．2．8 毒力鉴定 | 第45页 |
| 2．1．2．9 寄主反应测定 | 第45页 |
| 2．1．2．10 病毒增殖速率的测定 | 第45-46页 |
| 2．1．2．11 弱毒株的交互保护作用 | 第46页 |
| 2．1．2．12 弱毒株的接种方法 | 第46页 |
| 2．2 结果 | 第46-57页 |
| 2．2．1 提纯病毒的电镜观察 | 第46页 |
| 2．2．2 普通烟的症状特征 | 第46页 |
| 2．2．3 TMV抗血清效价，提纯病毒抗原性测定 | 第46-47页 |
| 2．2．4 间接ELISA法适宜的工作浓度 | 第47页 |
| 2．2．5 间接ELISA法灵敏度测定 | 第47-49页 |
| 2．2．6 诱变结果 | 第49页 |
| 2．2．7 毒力鉴定 | 第49-50页 |
| 2．2．8 强、弱毒株体外抗性比较 | 第50-51页 |
| 2．2．9 强、弱毒株寄主范围和反应测定 | 第51-53页 |
| 2．2．10 强、弱毒株的增殖速率 | 第53-54页 |
| 2．2．11 弱毒株的交互保护作用 | 第54-57页 |
| 2．2．12 弱毒株的接种方法 | 第57页 |
| 2．3 分析与讨论 | 第57-62页 |
| 2．3．1 诱变方法的选用、适宜诱变剂量的确定 | 第57-58页 |
| 2．3．2 弱毒株的检测、筛选 | 第58页 |
| 2．3．3 弱毒株的交互保护作用 | 第58-59页 |
| 2．3．4 弱毒株大量使用时的接种方法 | 第59页 |
| 2．3．5 弱毒株使用上的问题 | 第59-62页 |
| 3 烟草花叶病毒强、弱毒株对烟草植株的影响 | 第62-72页 |
| 3．1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 3．1．1 实验材料 | 第62页 |
| 3．1．2 实验方法 | 第62-63页 |
| 3．1．2．1 弱毒株的提纯 | 第62页 |
| 3．1．2．2 强、弱毒株在接种叶上的增殖速率比较 | 第62页 |
| 3．1．2．3 叶绿素含量的测定 | 第62页 |
| 3．1．2．4 可溶性蛋白含量的测定 | 第62-63页 |
| 3．1．2．5 包埋切片的取样方法 | 第63页 |
| 3．1．2．6 样品制备 | 第63页 |
| 3．2 结果 | 第63-67页 |
| 3．2．1 接种病毒的浓度 | 第63页 |
| 3．2．2 TMV强、弱毒株在接种叶上的增殖 | 第63-64页 |
| 3．2．3 TMV强、弱毒株引起烟草叶片中叶绿素a含量的变化 | 第64-65页 |
| 3．2．4 TMV强、弱毒株引起叶绿素b含量的变化 | 第65页 |
| 3．2．5 TMV强、弱毒株引起叶绿素含量的变化 | 第65-66页 |
| 3．2．6 TMV强、弱毒株引起可溶性蛋白含量的变化 | 第66页 |
| 3．2．7 TMV强、弱毒株侵染烟草后的叶绿体病理变化 | 第66-67页 |
| 3．3 分析与讨论 | 第67-72页 |
| 3．3．1 TMV强、弱毒株引起的叶绿体变化 | 第67-68页 |
| 3．3．2 强、弱毒株引起的可溶性蛋白含量的变化 | 第68-72页 |
| 4 烟草花叶病毒强、弱毒株全序列测定 | 第72-95页 |
| 4．1 材料与方法 | 第72-76页 |
| 4．1．1 材料 | 第72-73页 |
| 4．1．1．1 TMV毒源 | 第72页 |
| 4．1．1．2 试剂及酶类 | 第72页 |
| 4．1．1．3 引物设计与合成 | 第72-73页 |
| 4．1．2 方法 | 第73-76页 |
| 4．1．2．1 植物总RNA的提取 | 第73页 |
| 4．1．2．2 病毒RNA的提取 | 第73页 |
| 4．1．2．3 RT-PCR扩增 | 第73-74页 |
| 4．1．2．4 琼脂糖凝胶电泳及DNA片段的回收 | 第74-75页 |
| 4．1．2．5 质粒连接 | 第75页 |
| 4．1．2．6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第75页 |
| 4．1．2．7 转化 | 第75页 |
| 4．1．2．8 质粒的提取 | 第75-76页 |
| 4．1．2．9 重组质粒的酶切鉴定 | 第76页 |
| 4．1．2．10 重组克隆的PCR鉴定 | 第76页 |
| 4．1．2．11 DNA序列测定及分析 | 第76页 |
| 4．2 结果 | 第76-93页 |
| 4．2．1 TMV-W PCR产物及重组质粒酶切鉴定 | 第76-77页 |
| 4．2．2 TMV-017 PCR产物及重组质粒酶切鉴定 | 第77页 |
| 4．2．3 TMV-152 PCR产物及重组质粒酶切鉴定 | 第77-79页 |
| 4．2．4 强、弱毒株序列分析 | 第79-87页 |
| 4．2．5 TMV-W基因组结构 | 第87-88页 |
| 4．2．6 TMV强、弱毒株推断的126／183kDa蛋白氨基酸序列比较 | 第88-92页 |
| 4．2．7 TMV强、弱毒株推断的运动蛋白氨基酸序列比较 | 第92页 |
| 4．2．8 TMV强、弱毒株推断的外壳蛋白氨基酸序列 | 第92-93页 |
| 4．3 分析与讨论 | 第93-95页 |
| 4．3．1 TMV-W株系的鉴定 | 第93页 |
| 4．3．2 弱毒株致弱因子的定位 | 第93-95页 |
| 5 烟草花叶病毒强、弱毒株缺失复制酶基因的转化烟草获得及抗TMV测定 | 第95-120页 |
| 5．1 材料与方法 | 第95-103页 |
| 5．1．1 材料 | 第95-97页 |
| 5．1．1．1 毒源 | 第95页 |
| 5．1．1．2 菌株 | 第95页 |
| 5．1．1．3 质粒 | 第95-96页 |
| 5．1．1．4 试剂 | 第96-97页 |
| 5．1．2 方法 | 第97-103页 |
| 5．1．2．1 引物设计 | 第97页 |
| 5．1．2．2 植物总RNA的提取 | 第97页 |
| 5．1．2．3 RT-PCR扩增目的片段 | 第97-98页 |
| 5．1．2．4 植物表达载体的构建 | 第98页 |
| 5．1．2．5 转化农杆菌 | 第98页 |
| 5．1．2．6 重组农杆菌PCR鉴定 | 第98页 |
| 5．1．2．7 转化烟草 | 第98-100页 |
| 5．1．2．8 外源片段整合的初步检测 | 第100-101页 |
| 5．1．2．9 外源片段转录的初步检测 | 第101页 |
| 5．1．2．10 缺失复制酶抗血清的制备 | 第101-103页 |
| 5．1．2．11 再生植株抗性测定 | 第103页 |
| 5．2 结果 | 第103-116页 |
| 5．2．1 三个片段的PCR产物 | 第103页 |
| 5．2．2 重组质粒的酶切鉴定 | 第103-106页 |
| 5．2．2．1 E1E2片段 | 第104-106页 |
| 5．2．2．2 R1E2片段 | 第106页 |
| 5．2．2．3 R1R2片段 | 第106页 |
| 5．2．3 重组农杆菌的酶切鉴定及PCR鉴定 | 第106页 |
| 5．2．4 农杆菌的转化和芽的分化 | 第106-109页 |
| 5．2．5 小芽的根分化 | 第109页 |
| 5．2．6 扩繁和移栽 | 第109页 |
| 5．2．7 Southern点杂交初步检测外源片段的整合 | 第109-111页 |
| 5．2．7．1 地高辛标记的cDNA探针 | 第109页 |
| 5．2．7．2 cDNA探针灵敏度检测 | 第109-110页 |
| 5．2．7．3 Southern点杂交检测再生植株中的外源片段 | 第110-111页 |
| 5．2．8 RT-PCR Southern点杂交检测外源片段的转录 | 第111页 |
| 5．2．9 缺失复制酶抗血清的制备 | 第111-113页 |
| 5．2．9．1 原核表达载体的构建 | 第111-113页 |
| 5．2．9．2 融合蛋白的诱导表达 | 第113页 |
| 5．2．9．3 免疫斑点杂交测定抗血清的适宜浓度 | 第113页 |
| 5．2．10 抗性测定 | 第113-116页 |
| 5．3 分析与讨论 | 第116-120页 |
| 5．3．1 较长片段的PCR扩增、克隆 | 第116页 |
| 5．3．2 复制酶抗血清的制备方法 | 第116-117页 |
| 5．3．3 根癌农杆菌Ti质粒介导的叶盘转化法 | 第117-118页 |
| 5．3．4 复制酶介导的抗性研究 | 第118-120页 |
| 结论与进一步研究的建议 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 附录一： 所用的试剂与缓冲液的配制 | 第140-143页 |
| 附录二： 缩写词和英汉对照 | 第143-144页 |
