| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 英文缩略表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-36页 |
| ·IFN-γ研究进展 | 第16-31页 |
| ·IFN-γ的分子结构和编码基因 | 第17-18页 |
| ·IFN-γ的诱生 | 第18-19页 |
| ·重组IFN-γ的研究 | 第19-20页 |
| ·IFN-γ基因的转录调控 | 第20-22页 |
| ·IFN-γ的生物学活性及其作用机制 | 第22-26页 |
| ·IFN-γ的检测方法研究 | 第26-28页 |
| ·IFN-γ应用研究及前景 | 第28-31页 |
| ·IFN-γ受体及其介导的信号转导研究进展 | 第31-36页 |
| ·IFNGR的结构特点 | 第32页 |
| ·IFNGR介导的信号转导 | 第32-35页 |
| ·IFN-γ信号通路的负反馈调控 | 第35-36页 |
| 第二章 猪IFN-γ融合表达和纯化 | 第36-52页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·实验菌种和载体 | 第36页 |
| ·酶和试剂 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·溶液 | 第37-38页 |
| ·仪器与设备 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-45页 |
| ·表达载体的构建 | 第39-42页 |
| ·重组菌的诱导表达及表达条件的优化 | 第42-43页 |
| ·GST-pIFN-γ高效表达产物的纯化 | 第43-44页 |
| ·纯化GST-pIFN-γ蛋白分析 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| ·GST-pIFN-γ融合蛋白诱导表达条件的优化 | 第46-47页 |
| ·GST-pIFN-γ的高效表达及纯化 | 第47-48页 |
| ·纯化GST-pIFN-γ蛋白含量及产量测定 | 第48-49页 |
| ·表达产物Western-blot分析 | 第49页 |
| ·分析讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 重组GST-pIFN-γ融合蛋白抗病毒活性及其理化特性研究 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·实验动物、细胞及病毒株 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·溶液 | 第52-53页 |
| ·仪器与设备 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-55页 |
| ·PK15 细胞的培养 | 第53-54页 |
| ·病毒毒价测定 | 第54页 |
| ·重组GST-pIFN-γ融合蛋白抗病毒活性分析 | 第54-55页 |
| ·GST-pIFN-γ稳定性研究 | 第55页 |
| ·机体毒副反应性研究 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-58页 |
| ·PRV和标准O型FMDV毒价测定 | 第55-56页 |
| ·GST-pIFN-γ抗病毒活性测定 | 第56页 |
| ·GST-pIFN-γ稳定性研究 | 第56-58页 |
| ·机体毒副反应性研究 | 第58页 |
| ·分析讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 带His标签猪IFN-γ的表达、纯化及活性分析 | 第59-65页 |
| ·材料与方法 | 第59-60页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-64页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第60页 |
| ·重组pIFN-γ诱导表达条件的优化 | 第60-61页 |
| ·重组pIFN-γ的纯化 | 第61-62页 |
| ·纯化重组pIFN-γ的含量及产量测定 | 第62页 |
| ·表达产物的Western-blot分析 | 第62-63页 |
| ·重组pIFN-γ的活性分析 | 第63-64页 |
| ·分析与讨论 | 第64-65页 |
| 第五章 重组猪IFN-γ体外抗弓形虫作用的研究 | 第65-71页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·虫株、细胞和实验动物 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·细胞培养 | 第66页 |
| ·弓形虫悬液制备 | 第66页 |
| ·培养细胞弓形虫攻虫剂量的测定 | 第66-67页 |
| ·重组猪IFN-γ诱导培养细胞抗弓形虫试验 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-70页 |
| ·弓形虫致细胞病变的观察 | 第67-68页 |
| ·弓形虫攻虫剂量的确定 | 第68页 |
| ·重组猪IFN-γ诱导细胞抗弓形虫结果 | 第68-70页 |
| ·分析与讨论 | 第70-71页 |
| 第六章 猪IFN-γ诱导PK15 细胞凋亡及其作用机制研究 | 第71-81页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·细胞及试剂 | 第71页 |
| ·溶液 | 第71-72页 |
| ·仪器与设备 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·PK15 细胞培养 | 第72页 |
| ·GST-pIFN-γ诱导及细胞收集 | 第72页 |
| ·凋亡DNA Ladder提取与电泳分析 | 第72-73页 |
| ·Hoechst 33258 荧光染色检测 | 第73页 |
| ·AO/EB荧光染色检测 | 第73页 |
| ·pIFN-γ对PK细胞端粒酶活性影响检测 | 第73-74页 |
| ·结果 | 第74-79页 |
| ·诱导细胞形态的观察 | 第74-75页 |
| ·诱导细胞DNA电泳分析 | 第75页 |
| ·Hoechest染色检测PK15 细胞凋亡 | 第75-76页 |
| ·AO/EB荧光染色检测PK15 细胞凋亡 | 第76-77页 |
| ·pIFN-γ对PK细胞端粒酶活性影响检测结果 | 第77-79页 |
| ·分析与讨论 | 第79-81页 |
| 第七章 猪IFN-γ单克隆抗体的研制及鉴定 | 第81-98页 |
| ·材料 | 第81-83页 |
| ·抗原、细胞系及实验动物 | 第81-82页 |
| ·试剂及耗材 | 第82页 |
| ·溶液及培养基 | 第82-83页 |
| ·仪器与设备 | 第83页 |
| ·方法 | 第83-87页 |
| ·间接ELISA法最佳抗原包被量及阳性血清最佳稀释度的确定 | 第83-84页 |
| ·动物免疫 | 第84页 |
| ·细胞融合 | 第84-85页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第85页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化、冻存和复苏 | 第85-86页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第86页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定 | 第86-87页 |
| ·结果 | 第87-94页 |
| ·间接ELISA法最佳抗原包被量及阳性血清稀释滴度的确定 | 第87页 |
| ·第三次免疫后BALB/c小鼠血清ELISA检测结果 | 第87-88页 |
| ·亚克隆和单克隆细胞株ELISA检测结果 | 第88-90页 |
| ·杂交瘤细胞及单抗特性鉴定 | 第90-92页 |
| ·单抗识别抗原表位分析 | 第92-94页 |
| ·分析讨论 | 第94-98页 |
| ·抗原 | 第94-95页 |
| ·动物选择和免疫 | 第95页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第95页 |
| ·瘤细胞和融合 | 第95-96页 |
| ·杂交瘤抗体的检测 | 第96页 |
| ·克隆化 | 第96-97页 |
| ·单克隆抗体亚类 | 第97页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体 | 第97页 |
| ·单抗的稳定性实验 | 第97页 |
| ·pIFN-γ单抗的应用 | 第97-98页 |
| 第八章 猪IFN-γ受体基因克隆、表达及功能研究 | 第98-116页 |
| ·材料 | 第98-99页 |
| ·试验动物、菌种和载体 | 第98-99页 |
| ·酶和试剂 | 第99页 |
| ·培养基 | 第99页 |
| ·溶液 | 第99页 |
| ·方法 | 第99-106页 |
| ·淋巴细胞的分离与培养 | 第99-100页 |
| ·淋巴细胞的刺激诱导 | 第100页 |
| ·总RNA的提取 | 第100页 |
| ·引物的设计与合成 | 第100-101页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第101-102页 |
| ·目的基因的克隆 | 第102页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第102-103页 |
| ·猪IFNGR基因序列及其编码蛋白的结构预测 | 第103页 |
| ·猪IFNGR基因表达引物的设计及扩增 | 第103-104页 |
| ·猪IFNGR表达载体构建及鉴定 | 第104-105页 |
| ·猪IFNGR胞外区的诱导表达及SDS－PAGE分析 | 第105页 |
| ·重组猪IFNGR表达产物的纯化 | 第105页 |
| ·纯化表达产物的检测 | 第105-106页 |
| ·猪IFNGR1 与IFNGR2 胞外区对pIFN-γ抗病毒效应的影响 | 第106页 |
| ·结果 | 第106-114页 |
| ·RNA提取结果 | 第106页 |
| ·RT-PCR产物 | 第106-107页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第107-108页 |
| ·猪IFNGR1 和IFNGR2 序列测定及分析 | 第108-111页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第111页 |
| ·猪IFNGR1 和IFNGR2 胞外区重组蛋白诱导表达 | 第111页 |
| ·猪IFNGR1 和IFNGR2 胞外区重组蛋白的纯化 | 第111-113页 |
| ·纯化重组蛋白含量测定 | 第113页 |
| ·纯化重组蛋白Western-blot分析 | 第113页 |
| ·猪IFNGR1 和IFNGR2 胞外区对pIFN-γ抗病毒效应的影响 | 第113-114页 |
| ·分析讨论 | 第114-116页 |
| 第九章 全文结论 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 作者简历 | 第132页 |
