黄曲霉毒素B1单克隆抗体和单链抗体的制备
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩写表 | 第10-11页 |
| 1.文献综述 | 第11-23页 |
| ·黄曲霉毒素 | 第11-14页 |
| ·黄曲霉毒素的种类及理化性质 | 第11-12页 |
| ·黄曲霉毒素的毒性 | 第12页 |
| ·黄曲霉毒素的致癌性 | 第12-13页 |
| ·黄曲霉毒素在体内的代谢 | 第13页 |
| ·黄曲霉毒素与人类健康的关系问题 | 第13页 |
| ·容许量标准的制订 | 第13-14页 |
| ·抗体工程 | 第14-20页 |
| ·第一代——多克隆抗血清 | 第14页 |
| ·第二代——单克隆抗体 | 第14-15页 |
| ·第三代——基因工程抗体 | 第15-16页 |
| ·scFv的表达 | 第16-20页 |
| ·黄曲霉毒素的检测 | 第20-22页 |
| ·生物学方法 | 第20页 |
| ·物理化学方法 | 第20-21页 |
| ·免疫学方法 | 第21-22页 |
| ·研究意义 | 第22-23页 |
| 2.材料与方法 | 第23-37页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·细胞及细胞株 | 第23页 |
| ·质粒载体 | 第23页 |
| ·PCR引物 | 第23页 |
| ·试剂与材料 | 第23-24页 |
| ·仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·动物免疫与效价测定 | 第25-26页 |
| ·测小鼠血清效价 | 第26-27页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备及培养 | 第27-29页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第29-30页 |
| ·AFB1单链抗体基因的克隆 | 第30-37页 |
| ·杂交瘤细胞的RNA提取 | 第30页 |
| ·cDNA的合成 | 第30-31页 |
| ·重、轻链可变区基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·scFv片段的组装 | 第31-32页 |
| ·pCANTAB 5E-seFv重组质粒的构建 | 第32-34页 |
| ·电转感受态菌TG1的制备 | 第34页 |
| ·scFv单链抗体噬菌体库的构建 | 第34-35页 |
| ·单链噬菌体抗体库的富集筛选 | 第35-36页 |
| ·scFv单链抗体融合表达和可溶性表达 | 第36-37页 |
| 3.结果和分析 | 第37-45页 |
| ·免疫小鼠血清效价的鉴定 | 第37页 |
| ·细胞融合 | 第37-38页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选和克隆化 | 第38-39页 |
| ·黄曲霉毒素B1单链抗体基因的克隆 | 第39-42页 |
| ·评价细胞RNA质量 | 第39-40页 |
| ·V_H、V_(JK-MIX)基因的扩增 | 第40页 |
| ·scFv基因的扩增与组装 | 第40-41页 |
| ·pQY1.5质粒双酶切 | 第41页 |
| ·噬菌体抗体库的构建及噬菌体展示 | 第41-42页 |
| ·scFv特异性鉴定 | 第42-45页 |
| ·ELISA检测鉴定 | 第42-43页 |
| ·可溶性表达 | 第43-44页 |
| ·scFv的PCR验证 | 第44页 |
| ·重组质粒231F酶切验证 | 第44-45页 |
| 4.讨论 | 第45-50页 |
| ·抗原及动物的免疫 | 第45页 |
| ·细胞融合及其影响因素 | 第45-47页 |
| ·骨髓瘤细胞 | 第45页 |
| ·脾细胞 | 第45-46页 |
| ·融合剂 | 第46页 |
| ·融合操作 | 第46页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第46-47页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第47页 |
| ·污染和控制 | 第47页 |
| ·杂交瘤细胞RNA的提取 | 第47页 |
| ·seFv的组装和扩增 | 第47-48页 |
| ·噬菌体抗体库的构建 | 第48页 |
| ·噬菌体表达载体 | 第48-49页 |
| ·影响噬菌体展示及淘洗的因素 | 第49-50页 |
| 附录 | 第50-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
