摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
1 综述 | 第11-24页 |
·稻瘟病菌致病性研究进展 | 第11-15页 |
·稻瘟病菌的致病性分化 | 第11-13页 |
·稻瘟病菌无毒基因及其变异研究 | 第13-15页 |
·稻瘟病菌无毒基因 | 第13-15页 |
·无毒基因的应用前景 | 第15页 |
·稻瘟病菌变异机制 | 第15-18页 |
·物理诱变 | 第16页 |
·化学诱变 | 第16页 |
·无性重组 | 第16-17页 |
·有性重组 | 第17页 |
·质粒插入突变 | 第17-18页 |
·突变 | 第18页 |
·稻瘟病菌功能基因组研究 | 第18-20页 |
·同源基因克隆及候选基因敲除法 | 第20页 |
·图位克隆法 | 第20页 |
·T-DNA插入在真菌功能基因组研究上的运用 | 第20-24页 |
2 材料与方法 | 第24-41页 |
·供试菌株: | 第24页 |
·接种水稻: | 第24页 |
·培养基 | 第24-25页 |
·抗生素 | 第25页 |
·突变体致病性的测定 | 第25-27页 |
·稻瘟病菌菌株的活化、扩大培养及产孢 | 第25页 |
·育苗及活体接种 | 第25页 |
·活体接种发病情况调查与记载 | 第25-26页 |
·离体接种 | 第26-27页 |
·离体用水稻苗培育 | 第26页 |
·水稻叶片的离体接种 | 第26页 |
·离体接种发病情况调查及记载 | 第26-27页 |
·潮霉素抗性验证 | 第27页 |
·突变体生长发育的观察 | 第27-28页 |
·稻瘟病菌基因组DNA的提取及检测 | 第28-29页 |
·DNA提取 | 第28页 |
·DNA质量检测 | 第28-29页 |
·基因组DNA琼脂糖电泳 | 第29页 |
·稻瘟病菌RNA的提取 | 第29-30页 |
·质粒的提取及检测 | 第30-31页 |
·T-DNA插入分子检测 | 第31-35页 |
·普通PCR(POLYMERASECHAINREACTION,PCR)检测方法 | 第31页 |
·热不对称嵌套PCR(THERMAL ASYMMETRIC INTERLACED PCR TAIL-PCR)检测方法 | 第31-33页 |
·HIGH-EFFICIENT THERMAL ASYMMETRIC INTERLACED PCR(HITAIL-PCR) | 第33-35页 |
·突变体基因组DNA的限制性酶切 | 第35页 |
·酶切产物的连接 | 第35页 |
·TAIL-PCR产物的克隆及测序 | 第35-38页 |
·TAIL-PCR产物DNA片段的回收 | 第35-36页 |
·回收的DNA片段连接 | 第36页 |
·E.COLI DH5A感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
·感受态细胞的转化 | 第37页 |
·质粒DNA的提取 | 第37-38页 |
·DNA测序及蛋白序列分析 | 第38页 |
·RT-PCR | 第38-39页 |
·突变体有性交配后代培养物潮霉素分离比例 | 第39-41页 |
3 结果与分析 | 第41-55页 |
·致病性变异的T-DNA突变体筛选 | 第41-42页 |
·潮霉素抗性验证 | 第42-43页 |
·潮霉素基因片段扩增验证 | 第43-44页 |
·致病性突变体表性分析 | 第44页 |
·T-DNA插入侧翼序列分析 | 第44-46页 |
·TAIL-PCR方法 | 第44-45页 |
·HI TAIL-PCR方法 | 第45-46页 |
·致病性突变体T-DNA侧翼序列的克隆与测序 | 第46-52页 |
·RT-PCR验证T-DNA插入对基因影响 | 第52-54页 |
·致病性突变体交配型的验证 | 第54-55页 |
·有性交配子囊孢子培养物潮霉素抗性分离比例 | 第54-55页 |
4 结论与讨论 | 第55-59页 |
·突变体致病性稳定分析 | 第55-56页 |
·接种方式选择 | 第56页 |
·快速筛选稻瘟病菌所需基因的突变体的途径 | 第56-57页 |
·T-DNA侧翼序列的扩增 | 第57页 |
·关于交配培养 | 第57-58页 |
·有待进一步研究的问题 | 第58-59页 |
参考文献: | 第59-63页 |
致谢: | 第63页 |