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稻瘟病菌T-DNA插入致病突变体筛选及分析

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
1 综述第11-24页
   ·稻瘟病菌致病性研究进展第11-15页
     ·稻瘟病菌的致病性分化第11-13页
     ·稻瘟病菌无毒基因及其变异研究第13-15页
       ·稻瘟病菌无毒基因第13-15页
       ·无毒基因的应用前景第15页
   ·稻瘟病菌变异机制第15-18页
     ·物理诱变第16页
     ·化学诱变第16页
     ·无性重组第16-17页
     ·有性重组第17页
     ·质粒插入突变第17-18页
     ·突变第18页
   ·稻瘟病菌功能基因组研究第18-20页
     ·同源基因克隆及候选基因敲除法第20页
     ·图位克隆法第20页
   ·T-DNA插入在真菌功能基因组研究上的运用第20-24页
2 材料与方法第24-41页
   ·供试菌株:第24页
   ·接种水稻:第24页
   ·培养基第24-25页
   ·抗生素第25页
   ·突变体致病性的测定第25-27页
     ·稻瘟病菌菌株的活化、扩大培养及产孢第25页
     ·育苗及活体接种第25页
     ·活体接种发病情况调查与记载第25-26页
     ·离体接种第26-27页
       ·离体用水稻苗培育第26页
       ·水稻叶片的离体接种第26页
       ·离体接种发病情况调查及记载第26-27页
     ·潮霉素抗性验证第27页
   ·突变体生长发育的观察第27-28页
   ·稻瘟病菌基因组DNA的提取及检测第28-29页
     ·DNA提取第28页
     ·DNA质量检测第28-29页
   ·基因组DNA琼脂糖电泳第29页
   ·稻瘟病菌RNA的提取第29-30页
   ·质粒的提取及检测第30-31页
   ·T-DNA插入分子检测第31-35页
     ·普通PCR(POLYMERASECHAINREACTION,PCR)检测方法第31页
     ·热不对称嵌套PCR(THERMAL ASYMMETRIC INTERLACED PCR TAIL-PCR)检测方法第31-33页
     ·HIGH-EFFICIENT THERMAL ASYMMETRIC INTERLACED PCR(HITAIL-PCR)第33-35页
     ·突变体基因组DNA的限制性酶切第35页
     ·酶切产物的连接第35页
   ·TAIL-PCR产物的克隆及测序第35-38页
     ·TAIL-PCR产物DNA片段的回收第35-36页
     ·回收的DNA片段连接第36页
     ·E.COLI DH5A感受态细胞的制备第36-37页
     ·感受态细胞的转化第37页
     ·质粒DNA的提取第37-38页
   ·DNA测序及蛋白序列分析第38页
   ·RT-PCR第38-39页
   ·突变体有性交配后代培养物潮霉素分离比例第39-41页
3 结果与分析第41-55页
   ·致病性变异的T-DNA突变体筛选第41-42页
   ·潮霉素抗性验证第42-43页
   ·潮霉素基因片段扩增验证第43-44页
   ·致病性突变体表性分析第44页
   ·T-DNA插入侧翼序列分析第44-46页
     ·TAIL-PCR方法第44-45页
     ·HI TAIL-PCR方法第45-46页
   ·致病性突变体T-DNA侧翼序列的克隆与测序第46-52页
   ·RT-PCR验证T-DNA插入对基因影响第52-54页
   ·致病性突变体交配型的验证第54-55页
     ·有性交配子囊孢子培养物潮霉素抗性分离比例第54-55页
4 结论与讨论第55-59页
   ·突变体致病性稳定分析第55-56页
   ·接种方式选择第56页
   ·快速筛选稻瘟病菌所需基因的突变体的途径第56-57页
   ·T-DNA侧翼序列的扩增第57页
   ·关于交配培养第57-58页
   ·有待进一步研究的问题第58-59页
参考文献:第59-63页
致谢:第63页

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