| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-10页 |
| 第一章:文献综述 | 第10-23页 |
| 一、植物气孔运动信号转导机理研究进展 | 第10-18页 |
| 1 气孔运动中的离子通道 | 第10-12页 |
| 2 光诱导气孔运动的信号转导 | 第12-13页 |
| 3 CO_2诱导的气孔关闭 | 第13页 |
| 4 ABA诱导的气孔关闭 | 第13-17页 |
| 5 保卫细胞突变体和气孔运动 | 第17-18页 |
| 6 结语 | 第18页 |
| 二、植物微管在气孔运动中的作用研究进展 | 第18-20页 |
| 三、植物微管结合蛋白MAP65的研究进展 | 第20-22页 |
| 四、本课题研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章:材料与方法 | 第23-34页 |
| 1 试验材料和试剂 | 第23-24页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 试验方法 | 第24-29页 |
| ·拟南芥幼苗的培养 | 第24页 |
| ·CTAB法小量提取拟南芥总基因组DNA | 第24-25页 |
| ·目的基因的获得 | 第25页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增产物与pGEM-T载体的连接 | 第26页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态 | 第26-27页 |
| ·pGEM-T载体连接体系的转化(热击法) | 第27页 |
| ·碱裂解法小提质粒 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA酶切验证 | 第28页 |
| ·DNA测序 | 第28-29页 |
| 3 AtMAP65-1-GFP融合基因表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·碱法少量提取质粒 | 第29页 |
| ·重组克隆PCR鉴定 | 第29-30页 |
| ·酶切验证 | 第30页 |
| ·重组载体的测序鉴定 | 第30页 |
| 4 转化根瘤农杆菌 | 第30-32页 |
| ·冻融热击法 | 第30-31页 |
| ·转化子的PCR和酶切鉴定 | 第31页 |
| ·根瘤农杆菌介导转化拟南芥 | 第31-32页 |
| 5 鉴定转基因植株 | 第32-34页 |
| ·种子消毒和播种 | 第32页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第32-33页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第33-34页 |
| 第三章:实验结果与分析 | 第34-46页 |
| 1 游离GFP载体pG35s-GFP的构建 | 第34页 |
| 2 将目的基因AtMAP65-1连接到T载体上并酶切验证 | 第34-35页 |
| 3 pGMAP65-1:GFP融合基因表达载体的构建 | 第35-41页 |
| ·将目的基因连接到中间载体PUC18上并经PCR扩曾验证 | 第35-36页 |
| ·将得到的中间载体进一步用酶切验证 | 第36-37页 |
| ·植物表达载体的多重酶切鉴定 | 第37-41页 |
| 4 农杆菌转化及转基因拟南芥的获得 | 第41-42页 |
| ·抗性筛选 | 第41页 |
| ·转基因拟南芥的PCR检测 | 第41-42页 |
| 5 转化效率的比较 | 第42-43页 |
| 6 荧光显微检测 | 第43-44页 |
| ·高表达株系的筛选 | 第43-44页 |
| ·各转基因植株在各器官内荧光分布情况 | 第44页 |
| 7 GFP在拟南芥气孔保卫细胞中表达 | 第44-46页 |
| ·AtMAP65-1在开放气孔保卫细胞中的分布 | 第44-45页 |
| ·AtMAP65-1在关闭气孔保卫细胞中的分布 | 第45-46页 |
| 第四章:讨论 | 第46-48页 |
| 第五章:结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 图版 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
