| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-21页 |
| ·毒素蛋白研究进展 | 第11-16页 |
| ·红火蚁概述 | 第11页 |
| ·毒液的致敏性研究 | 第11-12页 |
| ·生物碱 | 第12页 |
| ·毒素蛋白 | 第12-16页 |
| ·生物信息资源及生物信息学分析方法 | 第16-18页 |
| ·生物信息资源 | 第16-17页 |
| ·生物信息学基本的分析方法 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-21页 |
| ·原核表达体系的研究和应用 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统的基本原理 | 第19页 |
| ·影响外源基因表达的因素 | 第19-20页 |
| ·表达载体pET43.1 | 第20-21页 |
| 第2章 绪论 | 第21-24页 |
| ·研究的目的和意义 | 第21页 |
| ·研究的内容 | 第21-22页 |
| ·Soli1、Soli4基因的克隆与序列分析 | 第21-22页 |
| ·Soli1、Soli4基因在大肠杆菌中的表达、纯化与活性分析 | 第22页 |
| ·总的技术路线 | 第22-24页 |
| ·Soli1、Soli4基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·Soli1、Soli4基因在大肠杆菌中的表达 | 第23-24页 |
| 第3章 红火蚁致敏毒素Soli1、Soli4基因的克隆 | 第24-39页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·质粒、菌株及培养条件 | 第24页 |
| ·仪器和试剂 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·红火蚁总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·基因扩增引物设计及合成 | 第25页 |
| ·RT-PCR扩增致敏毒素Soli1、Soli4基因 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的转化 | 第28页 |
| ·菌液PCR快速检测转化子 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第29-30页 |
| ·克隆基因的测序 | 第30页 |
| ·核苷酸和氨基酸的序列分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-39页 |
| ·红火蚁总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·引物的设计 | 第31页 |
| ·RT-PCR克隆 | 第31页 |
| ·致敏毒素基因的测序与分析 | 第31-35页 |
| ·致敏毒素蛋白的氨基酸序列分析 | 第35页 |
| ·致敏毒素基因编码蛋白的结构分析 | 第35-39页 |
| 第4章 Soli1、Soli4基因在大肠杆菌中的表达 | 第39-53页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·仪器和试剂 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-47页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第42-43页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第44-46页 |
| ·蛋白活性试验 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-53页 |
| ·nPCR反应 | 第47-48页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中诱导表达 | 第49-50页 |
| ·表达产物的western blot检测 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白的活性试验 | 第52-53页 |
| 第5章 讨论 | 第53-56页 |
| 1 表达系统与质粒选择 | 第53页 |
| 2 致敏毒素Soli1和Soli4基因的核苷酸序列分析 | 第53-54页 |
| 3 鉴定重组质粒和融合蛋白 | 第54页 |
| 4 融合蛋白的纯化与活性检测 | 第54-55页 |
| 5 致敏毒素蛋白结构与功能的关系 | 第55-56页 |
| 第6章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 缩写词 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 硕士期间发表论文及参与课题情况 | 第63页 |
