| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 病原诱导型启动子的分离和鉴定 | 第11-77页 |
| 1.前言 | 第11-38页 |
| ·启动子概述 | 第12-15页 |
| ·启动子的结构和功能 | 第12-15页 |
| ·已克隆的启动子概述 | 第15-17页 |
| ·组成型的启动子 | 第16页 |
| ·组织特异性表达的启动子 | 第16页 |
| ·诱导表达的启动子 | 第16-17页 |
| ·研究启动子功能的技术方法 | 第17-23页 |
| ·启动子的预测工具 | 第18页 |
| ·准确定位转录起始点的技术—5’陕速扩增cDNA末端(5’RACE) | 第18-19页 |
| ·启动子的克隆方法 | 第19-20页 |
| ·启动子探针型质粒载体 | 第19页 |
| ·利用PCR的方法克隆启动子 | 第19-20页 |
| ·启动子强弱和功能的定性、定量检测 | 第20-21页 |
| ·鉴别RNA聚合酶等反式作用因子在启动子上结合位点的方法 | 第21-23页 |
| ·DNAase法 | 第21-22页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第22页 |
| ·硫酸二甲酯(DMS)法 | 第22页 |
| ·甲基化干扰实验 | 第22页 |
| ·随机PCR | 第22-23页 |
| ·蛋白质-核酸杂交实验 | 第23页 |
| ·利用EXOIII/SI酶的作用构建缺失克隆 | 第23页 |
| ·植物中的转录因子简介 | 第23-26页 |
| ·转录因子的结构特征 | 第24-26页 |
| ·植物中的WRKY基因家族概述 | 第26-33页 |
| ·WRKY转录因子的结构 | 第27-28页 |
| ·W-盒 | 第28-29页 |
| ·WRKY转录因子的生物学功能 | 第29-32页 |
| ·抗病相关功能 | 第29-30页 |
| ·衰老相关的调控 | 第30页 |
| ·对损伤诱导表达的调控 | 第30-31页 |
| ·对发育的调控 | 第31页 |
| ·对代谢途径的调控 | 第31-32页 |
| ·WRKY蛋白的诱导激发物 | 第32-33页 |
| ·植物激素的胁迫 | 第32-33页 |
| ·冷、热害及干旱的胁迫 | 第33页 |
| ·植物抗病的分子机理研究 | 第33-38页 |
| ·启动子分析在植物抗病机理研究中的作用 | 第33页 |
| ·植物抗病机理的研究概述 | 第33-34页 |
| ·植物抗病反应中涉及的基因 | 第34-35页 |
| ·植物的抗病主效基因 | 第34页 |
| ·植物的抗病相关基因 | 第34-35页 |
| ·抗病基因产物和病原物的识别 | 第35-36页 |
| ·植物抗病反应中的信号分子 | 第36-38页 |
| ·水杨酸 | 第36-37页 |
| ·乙烯 | 第37页 |
| ·茉莉酸 | 第37-38页 |
| 2.研究的目的和意义 | 第38页 |
| 3.材料和方法 | 第38-50页 |
| ·水稻材料和接种鉴定 | 第38-39页 |
| ·水稻品种 | 第38页 |
| ·白叶枯病的菌株及接种方法 | 第38-39页 |
| ·基因组及cDNA文库 | 第39页 |
| ·载体、菌株和质粒 | 第39页 |
| ·DNA的抽提及Southern杂交 | 第39-40页 |
| ·总RNA的抽提及操作 | 第40页 |
| ·启动子序列分析 | 第40-42页 |
| ·P_(WRKY13)启动子全长和缺失片段的获得 | 第42-43页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第43页 |
| ·全长及缺失启动子片段的遗传转化 | 第43页 |
| ·启动子的瞬时表达系统 | 第43页 |
| ·GUS的定量及定性分析 | 第43-44页 |
| ·激素处理 | 第44页 |
| ·凝胶阻滞(gel retardation assay) | 第44-45页 |
| ·核蛋白的抽提 | 第44页 |
| ·凝胶阻滞 | 第44-45页 |
| ·定点突变 | 第45-46页 |
| ·酵母单杂交 | 第46页 |
| ·蛋白质的亚细胞定位 | 第46-49页 |
| ·蛋白的原核表达 | 第49-50页 |
| 4.结果与分析 | 第50-67页 |
| ·P_(WRKY13)启动子的结构 | 第50-51页 |
| ·全长及截短启动子片段的表达模式 | 第51-54页 |
| ·P_(WRKY13)启动子上与病原诱导相关的顺式作用位点 | 第54-59页 |
| ·鉴定的病原诱导响应位点对基因的表达具有正或负调控的作用 | 第59-61页 |
| ·筛选P_(WRKY13)调控位点上的结合蛋白及验证 | 第61-64页 |
| ·P_(WRKY13)调控位点上结合蛋白的表达模式 | 第64-66页 |
| ·激素对P_(WRKY13)启动子的效应 | 第66-67页 |
| 5.讨论 | 第67-77页 |
| ·WRKY13是被一系列顺式和反式作用因子调控的 | 第67-70页 |
| ·激素与P_(WRKY13)启动子 | 第70-72页 |
| ·P_(WRKY13)启动子上的调控蛋白 | 第72-74页 |
| ·P_(WRKY13)启动子可能的调控模式 | 第74-77页 |
| 第二章 组织特异性启动子的分离和鉴定 | 第77-138页 |
| 1.前言 | 第77-80页 |
| 2.研究的目的和意义 | 第80页 |
| 3.材料和方法 | 第80-90页 |
| ·P_(D540)启动子全长与缺失片段的获得 | 第80-81页 |
| ·其它载体构建 | 第81-83页 |
| ·用于凝胶阻滞的探针 | 第83页 |
| ·定点突变 | 第83-84页 |
| ·实时定量PCR | 第84页 |
| ·酵母单杂交 | 第84-85页 |
| ·亚细胞定位 | 第85页 |
| ·蛋白的原核表达 | 第85页 |
| ·转基因植株中Bt蛋白含量的测定 | 第85-90页 |
| 4.结果与分析 | 第90-109页 |
| ·P_(D540)及截短的启动子片段的表达模式 | 第90-91页 |
| ·P_(D540)启动子的结构特征 | 第91-93页 |
| ·启动子缺失片段的组织表达模式 | 第93-94页 |
| ·负调控组织特异性表达的启动子片段的功能验证 | 第94-96页 |
| ·包含组织特异性调控顺式作用位点的DNA区段 | 第96-99页 |
| ·P_(D540)上调控组织特异表达的顺式作用位点 | 第99-101页 |
| ·顺式位点的定点突变分析 | 第101-102页 |
| ·P_(D540)启动子驱动抗虫基因的表达 | 第102-104页 |
| ·启动子上顺式作用位点的结合蛋白及其体外验证 | 第104-107页 |
| ·P_(D540)启动子上顺式位点上互作蛋白的表达模式 | 第107-109页 |
| 5.讨论 | 第109-138页 |
| ·P_(D540)包含调控组织特异表达的顺式作用位点 | 第109-111页 |
| ·P_(D540)启动子可能的调控模式 | 第111-112页 |
| ·P_(D540)启动子上的结合蛋白 | 第112-114页 |
| ·P_(D540)启动子的应用 | 第114页 |
| ·启动子研究的方法 | 第114-115页 |
| ·构建超级启动子 | 第115-138页 |
| 附录1:部分试验的详细步骤 | 第138-151页 |
| 附录2:用于P_(WRKY13)及P_(D540)凝胶阻滞研究的探针 | 第151-163页 |
| 附录3:已发表和待发表的论文、会议摘要及申请的专利 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165页 |
