| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 综述 | 第9-21页 |
| ·前言 | 第9-10页 |
| ·SAM 的生化和药理学作用 | 第10-13页 |
| ·SAM 的生化作用 | 第10-11页 |
| ·SAM 的药理学作用 | 第11-13页 |
| ·SAM 的生产方法 | 第13-14页 |
| ·化学合成生产 SAM | 第13页 |
| ·微生物发酵法 | 第13页 |
| ·酶法合成生产 SAM | 第13-14页 |
| ·SAM 合成酶的研究 | 第14-17页 |
| ·SAM 合成酶编码基因研究 | 第14-15页 |
| ·SAM 合成酶催化反应及酶活力研究 | 第15-17页 |
| ·SAM 合成酶克隆表达研究 | 第17页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第17-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第17-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优化 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 pPIC9K-sam2 重组表达载体构建及诱导表达 | 第21-40页 |
| ·材料与仪器 | 第21-23页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·试验试剂 | 第21-22页 |
| ·试剂配制 | 第22-23页 |
| ·主要设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-34页 |
| ·酿酒酵母基因组的提取 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增 SAM 合酶基因 | 第24-25页 |
| ·T 载体连接、转化及测序 | 第25-27页 |
| ·重组质粒pPIC9K-sam2 的构建 | 第27-28页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第28-29页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第29-32页 |
| ·SAM 合成酶的甲醇诱导表达 | 第32页 |
| ·低分子量蛋白SDS-PAGE | 第32-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-38页 |
| ·sam2 基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·T 载体连接及测序分析结果 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pPIC9K-sam2 的构建 | 第36-37页 |
| ·酵母转化菌株的筛选和表型鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 3 SAM 合酶提取纯化及酶活力测定 | 第40-47页 |
| ·材料与仪器 | 第40-41页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验试剂 | 第40页 |
| ·试剂配制 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·饱和硫酸铵沉淀法纯化蛋白 | 第41页 |
| ·重组蛋白酶活测定 | 第41-42页 |
| ·跟踪酶活测定 | 第42页 |
| ·Bradford 法测定蛋白含量 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·蛋白纯化 | 第43页 |
| ·分泌蛋白生物活性检测 | 第43-44页 |
| ·蛋白含量测定 | 第44-45页 |
| ·诱导表达阶段跟踪酶活测定 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 4 结论与展望 | 第47-49页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| ·展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录1 攻读硕士期间发表的论文目录 | 第55页 |