| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-26页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的研究进展 | 第9-19页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的来源及其在自然界的分布 | 第9-10页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的生理功能及生物学特性 | 第10-12页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的结构特性 | 第12-13页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的热稳定性和pH稳定性 | 第13-16页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的催化机理 | 第16页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的底物特异性 | 第16-17页 |
| ·三角酵母的D-氨基酸氧化酶 | 第17-18页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的基因克隆和序列分析 | 第18-19页 |
| ·D-氨基酸氧化酶基因的表达 | 第19-22页 |
| ·大肠杆菌(Escherichia coli) | 第19-20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris) | 第20-22页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的应用 | 第22-24页 |
| ·展望 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料、仪器和方法 | 第26-33页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·菌种及培养基配方 | 第26页 |
| ·抗生素溶液的配制 | 第26页 |
| ·固定化材料 | 第26-27页 |
| ·化学药品 | 第27-28页 |
| ·仪器与设备 | 第28-29页 |
| ·分析方法 | 第29-33页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第29页 |
| ·D-氨基酸氧化酶(DAAO)活力测定 | 第29-30页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第30-33页 |
| 第三章 D-氨基酸氧化酶基因的诱导表达条件优化 | 第33-44页 |
| 前言 | 第33-34页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-43页 |
| ·重组质粒的gel图 | 第37页 |
| ·daao基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·正交实验结果分析 | 第38-39页 |
| ·乳糖诱导的单因素条件优化 | 第39-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 第四章 D-氨基酸氧化酶基因工程菌高密度培养 | 第44-52页 |
| 前言 | 第44-45页 |
| ·材料与仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·菌种活化 | 第45页 |
| ·种子液 | 第45页 |
| ·发酵罐上工艺优化 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-51页 |
| ·诱导温度为23℃下高密度发酵的菌浓和酶活 | 第46-47页 |
| ·诱导温度为25℃下高密度发酵的菌浓和酶活 | 第47-48页 |
| ·诱导温度为28℃下高密度发酵的菌浓和酶活 | 第48-49页 |
| ·诱导温度为32℃下高密度发酵的菌浓和酶活 | 第49-50页 |
| ·诱导温度为37℃下高密度发酵的菌浓和酶活 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第51-52页 |
| 第五章 D-氨基酸氧化酶的分离纯化 | 第52-60页 |
| 前言 | 第52-53页 |
| ·材料与方法 | 第53-55页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-59页 |
| ·超声破壁最适时间的选择 | 第55-56页 |
| ·载体投入不同比例对酶与载体吸附效率的影响 | 第56-57页 |
| ·纯化D-氨基酸氧化酶SDS-PAGE图谱 | 第57-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 第六章 D-氨基酸氧化酶的固定化研究 | 第60-67页 |
| 前言 | 第60-61页 |
| ·材料与方法 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-66页 |
| ·D-氨基酸氧化酶的固定化效率 | 第62页 |
| ·最适反应温度的确定 | 第62-63页 |
| ·pH对酶活力的影响 | 第63页 |
| ·固定化酶的热稳定性 | 第63-64页 |
| ·固定化酶的pH稳定性 | 第64-65页 |
| ·DAAO米氏常数的测定 | 第65-66页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| 第七章 论文总结 | 第67-71页 |
| ·论文创新点 | 第67页 |
| ·论文后续工作与展望 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第77页 |