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甜椒细胞质小分子量热激蛋白基因的表达及其在温度逆境下的功能分析

英文缩写符号及其中英文对照第1-9页
中文摘要第9-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-27页
   ·HSP 的研究进展第13-23页
     ·HSP 的结构特点第14-15页
     ·热激反应的时间第15页
     ·HSP 的功能第15-20页
       ·HSP 具有分子伴侣的作用第15-17页
       ·HSP 与植物的耐热性第17-18页
       ·HSP 与植物的抗冷性第18-19页
       ·HSP 与植物的抗氧化能力第19页
       ·HSP 在植物发育中的作用第19-20页
     ·HSP 基因启动子结构特征第20-21页
     ·HSP 基因的表达调控第21-23页
   ·细胞质sHSP 与植物的耐冷性第23-25页
     ·细胞质sHSP 的分子伴侣功能第25页
   ·本研究目的、意义第25-27页
2 材料与方法第27-53页
   ·实验材料第27-28页
     ·植物材料第27页
     ·菌株与质粒第27页
     ·酶及生化试剂第27页
     ·PCR引物第27-28页
   ·实验方法第28-53页
     ·RNA提取第28-29页
     ·目的基因全长cDNA 的分离第29-35页
     ·Northern 杂交分析第35-39页
       ·总RNA 的提取第35页
       ·甲醛变性胶电泳第35-36页
       ·转膜第36-37页
       ·预杂交第37页
       ·探针的制备第37-39页
       ·杂交第39页
       ·洗膜第39页
       ·放射自显影第39页
     ·Western 杂交第39-43页
       ·抗体的制备第39-40页
       ·抗血清效价的测定(试管微量沉淀法)第40页
       ·Western 杂交第40-43页
     ·细胞质CaHSP18 基因正义表达载体的构建第43-45页
       ·编码区cDNA 添加酶切位点第43页
       ·质粒DNA 的提取第43页
       ·酶切反应第43-44页
       ·去磷酸化第44页
       ·回收第44页
       ·连接第44-45页
       ·转化第45页
       ·重组子的筛选第45页
     ·农杆菌介导转化番茄第45-47页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第45页
       ·冻融法转化农杆菌第45-46页
       ·利用农杆菌介导转化番茄第46-47页
     ·CTAB 法微量法提取基因组DNA第47-49页
       ·转基因植株的 PCR 筛选第48-49页
     ·转基因番茄生理指标的测定第49页
       ·光合放氧量的测定第49页
       ·叶绿素荧光参数测定第49页
     ·小分子量热激蛋白的原核表达第49-53页
       ·原核表达载体的构建第50页
       ·E.coli BL21原核表达的诱导第50页
       ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第50-52页
       ·大肠杆菌细胞活力实验第52-53页
3 结果与分析第53-65页
   ·CaHSP18同源性检索及分析第53-55页
   ·CaHSP18基因在甜椒中的表达第55-56页
   ·异源表达CaHSP18基因提高大肠杆菌在高温和低温下的生存能力第56-59页
   ·CaHSP18基因正义片段的筛选第59-65页
     ·CaHSP18基因表达载体的构建第59-60页
     ·CaHSP18基因表达载体的酶切鉴定第60-61页
     ·转基因番茄的PCR验证第61页
     ·转基因番茄的Northern杂交检测第61-62页
     ·转基因番茄的Western杂交检测第62页
     ·过量表达CaHSP18提转基因提高番茄的耐冷性第62-65页
4 讨论第65-70页
   ·CaHSP18 基因序列特征第65-66页
   ·CaHSP18的耐热性第66-67页
   ·CaHSP18 与耐冷性第67-68页
   ·热激蛋白与植物的光破坏防御机制第68-70页
5 主要结论第70-71页
6 参考文献第71-90页
附录第90-91页
致谢第91页

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