猪胰岛素样生长因子Ⅰ在原核与真核生物中的表达研究
| 原创性声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-4页 |
| 目录 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11-24页 |
| 胰岛素样生长因子研究进展综述 | 第11-24页 |
| 1 胰岛素样生长因子简介 | 第11-14页 |
| ·胰岛素样生长因子的发现 | 第11页 |
| ·胰岛素样生长因子Ⅰ的结构 | 第11-12页 |
| ·IGF-I的表达调控 | 第12-14页 |
| 2 IGF-I的功能研究进展 | 第14-16页 |
| ·IGF-I对动物生殖的影响 | 第14-15页 |
| ·IGF-I对动物生长性能的影响 | 第15-16页 |
| 3 IGF-I与疾病相关研究进展 | 第16-18页 |
| ·IGF-I与疾病发生相关研究进展 | 第16-17页 |
| ·IGF-I与疾病治疗相关研究进展 | 第17-18页 |
| 4 胰岛素样生长因子家族 | 第18-23页 |
| ·胰岛素样生长因子Ⅱ | 第19页 |
| ·IGFs受体 | 第19-21页 |
| ·IGF-I结合蛋白 | 第21-23页 |
| 5 展望 | 第23-24页 |
| 第二篇 试验研究 | 第24-51页 |
| 第一章 猪IGF-I的原核表达研究 | 第24-34页 |
| 1 材料与方法 | 第24-29页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-32页 |
| ·IGF-I基因的扩增结果 | 第29页 |
| ·重组质粒的PCR快速鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒诱导表达 | 第30页 |
| ·重组蛋白的优化表达 | 第30-32页 |
| 3 讨论与小结 | 第32-34页 |
| ·PCR产物分子克隆的策略 | 第32页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第32-33页 |
| ·诱导条件的优化 | 第33页 |
| ·不同表达载体对蛋白表达的影响 | 第33-34页 |
| 第二章 兔抗猪IGF-I融合蛋白多克隆抗体的制备 | 第34-40页 |
| 1 材料与方法 | 第34-37页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第37页 |
| ·多克隆抗体的制备与检测 | 第37-38页 |
| 3 讨论与小结 | 第38-40页 |
| ·蛋白的可溶性表达 | 第38页 |
| ·蛋白的纯化方法 | 第38-39页 |
| ·多克隆抗体效价检测 | 第39-40页 |
| 第三章 猪IGF-I的真核表达研究 | 第40-51页 |
| 1 材料与方法 | 第40-46页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| 2 结果 | 第46-48页 |
| ·目的基因拼接及表达质粒构建 | 第46页 |
| ·表达菌株的筛选及鉴定 | 第46页 |
| ·重组酵母Mut表型及多拷贝转化子筛选 | 第46-47页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第47-48页 |
| 3 讨论与小结 | 第48-51页 |
| ·毕赤酵母表达系统毕赤酵母 | 第48页 |
| ·目的基因的合成 | 第48-49页 |
| ·酵母表达载体的转化 | 第49页 |
| ·酵母表达上清的处理与检测 | 第49-50页 |
| ·酵母表达蛋白特异性的检测 | 第50-51页 |
| 全文结论 | 第51-57页 |
| 附录1：主要试剂及溶液的配制 | 第57-61页 |
| 附录2：主要仪器与设备 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
