| 第一章 文献综述 | 第1-33页 |
| ·绿色荧光蛋白(GPP)研究进展 | 第14-19页 |
| ·GFP标记概况 | 第14-16页 |
| ·GFP在丝状真菌中的应用 | 第16-19页 |
| ·球毛壳菌与绿色木霉生物防治研究现状 | 第19-23页 |
| ·球毛壳菌研究概况 | 第19-20页 |
| ·绿色木霉研究概况 | 第20-22页 |
| ·微生物农药的防治机理 | 第22-23页 |
| ·丝状真菌转化研究进展 | 第23-32页 |
| ·研究概况 | 第23-24页 |
| ·选择性标记和转化载体 | 第24-26页 |
| ·原生质体转化 | 第26-28页 |
| ·根癌农杆菌介导的转化(ATMT) | 第28-32页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第32-33页 |
| 第二章 材料、设备与常规分子生物学实验技术 | 第33-45页 |
| ·实验菌株、质粒与培养条件 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·培养基的配制 | 第34-36页 |
| ·常规分子生物学实验技术 | 第36-45页 |
| ·常规 PCR反应 | 第36-37页 |
| ·酶切反应 | 第37页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第37-38页 |
| ·DNA片段的凝胶回收 | 第38-39页 |
| ·酶切片段的去磷酸化处理 | 第39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·E.Coli DH5a 感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第40-41页 |
| ·CTAB法抽提质粒 | 第41页 |
| ·真菌培养物基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| ·Southern Blot | 第42-45页 |
| 第三章 球毛壳菌原生质体转化及 GFP标记转化子的生物防治特性研究 | 第45-71页 |
| <一)研究方法 | 第45-52页 |
| ·球毛壳菌菌丝准备 | 第45页 |
| ·原生质体制备 | 第45-47页 |
| ·裂解酶类型对原生质体产量的影响 | 第45-46页 |
| ·酶解温度与时间对原生质体产量的影响 | 第46页 |
| ·渗透压稳定剂类型与浓度对原生质体产量的影响 | 第46页 |
| ·其他因素如菌龄、裂解缓冲液类型对原生质体释放的影响 | 第46-47页 |
| ·原生质体活率测定 | 第47页 |
| ·原生质体释放方式观察 | 第47页 |
| ·原生质体再生 | 第47-48页 |
| ·再生培养基类型对原生质体再生率的影响 | 第47页 |
| ·酶解时间对原生质体再生率的影响 | 第47-48页 |
| ·渗透压稳定剂对原生质体再生率的影响 | 第48页 |
| ·原生质体再生率测定 | 第48页 |
| ·转化载体的构建 | 第48-50页 |
| ·抗生素敏感性测试与选择性标记确定 | 第48页 |
| ·PCR扩增SUR片段 | 第48-49页 |
| ·pBES重组质粒的构建 | 第49页 |
| ·启动子陷阱载体pES的构建 | 第49-50页 |
| ·原生质体转化 | 第50页 |
| ·转化子验证 | 第50-51页 |
| ·选择培养基上再次筛选 | 第50页 |
| ·PCR扩增插入片段验证 | 第50-51页 |
| ·Southern Blot验证插入片段及其拷贝数 | 第51页 |
| ·氯嘧磺隆敏感性测试 | 第51页 |
| ·荧光镜检确认 GFP的插入及在各组织中表达情况 | 第51页 |
| ·玻片对峙实验 | 第51页 |
| ·平板共培养实验 | 第51-52页 |
| <二>结果与分析 | 第52-71页 |
| ·各因素对原生质体产量的影响 | 第52-55页 |
| ·裂解酶种类对原生质体释放的影响 | 第52-53页 |
| ·酶解温度与时间对原生质体释放的影响 | 第53-54页 |
| ·渗透压稳定剂类型与浓度对原生质体释放的影响 | 第54页 |
| ·原生质体制备质量 | 第54-55页 |
| ·原生质体活率 | 第55-56页 |
| ·原生质体释放方式 | 第56页 |
| ·各因素对原生质体再生率的影响 | 第56-59页 |
| ·再生培养基对再生率的影响 | 第56-57页 |
| ·渗透压稳定剂对再生率的影响 | 第57-58页 |
| ·酶解时间对再生率的影响 | 第58页 |
| ·其他影响原生质体释放和再生的因素 | 第58-59页 |
| ·敏感性测试结果与质粒图谱 | 第59-62页 |
| ·转化子验证 | 第62-64页 |
| ·转化子稳定性检测 | 第62页 |
| ·转化效率与转化子中SUR基因的验证 | 第62-63页 |
| ·球毛壳菌野生型与转化子对氯嘧磺隆的敏感性对比 | 第63页 |
| ·转化子荧光镜检 | 第63-64页 |
| ·球毛壳菌与病原真菌对峙培养结果 | 第64-71页 |
| ·平板共培养生长速度测定 | 第64-66页 |
| ·球毛壳菌与各病原真菌平板共培养结果(22d) | 第66-68页 |
| ·球毛壳菌与立枯丝核菌玻片对峙镜检结果 | 第68-71页 |
| 第四章 绿色木霉的 GFP基因转化以及转化子的生防研究 | 第71-81页 |
| <一>研究方法 | 第71-74页 |
| ·原生质体制备 | 第71-72页 |
| ·转化载体 PCSN43-HPH-EYFP的构建 | 第72页 |
| ·原生质体转化 | 第72-73页 |
| ·转化子验证 | 第73页 |
| ·选择培养基上再次筛选 | 第73页 |
| ·PCR扩增插入片断 | 第73页 |
| ·潮霉素敏感性测试 | 第73页 |
| ·荧光镜检验证 GFP的插入及在各组织中表达情况 | 第73页 |
| ·绿色木霉与病原真菌平板共培养与载玻片对峙培养实验 | 第73-74页 |
| <二>结果与分析 | 第74-81页 |
| ·载体图谱 | 第74页 |
| ·转化子验证 | 第74-76页 |
| ·绿色木霉与病原真菌对峙培养结果 | 第76-81页 |
| ·平板共培养生长速度测定结果 | 第76-78页 |
| ·绿色木霉与各病原真菌平板共培养(8d) | 第78-79页 |
| ·绿色木霉与立枯丝核菌玻片对峙镜检结果 | 第79-81页 |
| 第五章 根癌农杆菌介导的球毛壳菌转化及土壤混合真菌基因组提取 | 第81-88页 |
| <一>研究方法 | 第81-84页 |
| ·双元载体的构建 | 第81页 |
| ·农杆菌的冻融法转化 | 第81-82页 |
| ·球毛壳菌的T-DNA转化 | 第82-83页 |
| ·转化子验证 | 第83页 |
| ·选择培养基上再次筛选 | 第83页 |
| ·转化子形态观察 | 第83页 |
| ·土壤真菌基因组 DNA提取与 PCR扩增条件优化 | 第83-84页 |
| ·土壤真菌基因组 DNA的提取 | 第83页 |
| ·土壤真菌基因组28SrDNA PCR扩增 | 第83-84页 |
| <二>结果与分析 | 第84-88页 |
| ·双元载体构建 | 第84-85页 |
| ·不同因素对转化效率的影响以及转化子形态观察 | 第85-86页 |
| ·土壤真菌基因组 DNA的提取与扩增 | 第86-88页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第88-92页 |
| ·总结 | 第88页 |
| ·讨论 | 第88-92页 |
| ·球毛壳菌原生质体制备与再生 | 第89页 |
| ·启动子陷阱技术 | 第89-90页 |
| ·球毛壳菌与绿色木霉生防机理研究 | 第90页 |
| ·农杆菌介导的转化 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
