| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 生物发酵床养猪技术 | 第14-16页 |
| ·概念 | 第14页 |
| ·生物发酵床养猪技术的理论基础 | 第14-15页 |
| ·生物发酵床养猪技术的研究进展及推广应用 | 第15-16页 |
| 2 生物发酵床养猪技术存在问题 | 第16-18页 |
| ·垫料资源分布不均匀 | 第16页 |
| ·猪只越夏成为问题 | 第16-17页 |
| ·难以使用消毒药品和贯彻全进全出制度 | 第17页 |
| ·疫病控制风险较大 | 第17-18页 |
| 3 发酵床病原菌研究现状 | 第18-20页 |
| ·微生物分离种类 | 第18页 |
| ·分离病原菌耐药性研究 | 第18-19页 |
| ·分离病原菌致病性研究 | 第19页 |
| ·产生病原菌原因 | 第19-20页 |
| 4 细菌鉴定方法与分子克隆 | 第20-21页 |
| 5 目的意义 | 第21-22页 |
| 第一章 生物发酵床垫料的细菌学分析 | 第22-40页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第22-23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-24页 |
| ·样品采集与保存 | 第23页 |
| ·发酵床垫料与猪粪便细菌分离 | 第23页 |
| ·发酵床垫料与猪粪便中细菌浓度分析 | 第23-24页 |
| ·小鼠致死性实验 | 第24页 |
| ·细菌生化鉴定 | 第24页 |
| ·主要病原菌药物敏感性实验 | 第24页 |
| 3 实验结果 | 第24-36页 |
| ·健康猪粪便与发酵床垫料细菌分离 | 第24-28页 |
| ·不同年龄猪舍发酵床与猪粪便细菌含量分析 | 第28-33页 |
| ·小鼠致病性实验 | 第33-34页 |
| ·细菌生化鉴定 | 第34-35页 |
| ·病原菌耐药性分析 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| ·发酵床垫料与猪粪便中细菌种类与数量区系对比分析 | 第37-39页 |
| ·发酵床养猪模式的研究趋势 | 第39-40页 |
| 第二章 细菌16S RDNA降落PCR检测方法的建立 | 第40-52页 |
| 1 实验材料 | 第40-41页 |
| ·主要培养基 | 第40页 |
| ·主要试剂与菌种 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-44页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·不同细菌基因组模板的制备 | 第41页 |
| ·细菌16S基因PCR扩增条件优化 | 第41-42页 |
| ·目的条带回收 | 第42页 |
| ·感受态细胞制备 | 第42-43页 |
| ·连接与转化 | 第43页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第43-44页 |
| ·序列测定与分析 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-49页 |
| ·退火温度对细菌16s基因PCR的影响 | 第44-45页 |
| ·引物浓度对PCR的影响 | 第45-46页 |
| ·模板浓度对PCR的影响 | 第46-47页 |
| ·发酵床垫料中主要细菌16S rDNA PCR扩增结果 | 第47页 |
| ·不同细菌16S rDNA克隆测序 | 第47-48页 |
| ·基于16S基因的进化分析 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·微生物的分类鉴定方法比较分析 | 第49-50页 |
| ·16S基因的PCR条件优化结果分析 | 第50页 |
| ·16s基因的克隆及测序结果分析 | 第50-52页 |
| 第三章 致病性大肠杆菌不耐热肠毒素与志贺毒素二重PCR检测方法的建立 | 第52-64页 |
| 1 实验材料 | 第52-53页 |
| ·实验菌种与主要培养基 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·实验器材 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-56页 |
| ·设计合成PCR检测引物 | 第53-54页 |
| ·细菌菌种活化与DNA模板制备 | 第54页 |
| ·分别进行单一PCR并优化PCR条件 | 第54-55页 |
| ·PCR产物克隆测序 | 第55页 |
| ·二重PCR条件优化 | 第55-56页 |
| ·使用建立二重PCR体系进行临床样本检测 | 第56页 |
| 3 实验结果 | 第56-61页 |
| ·退火温度对PCR的影响 | 第56-57页 |
| ·模板与引物浓度对单一PCR的影响 | 第57-59页 |
| ·PCR产物克隆测序 | 第59页 |
| ·二重PCR条件优化与特异性实验 | 第59-60页 |
| ·临床样本检测结果 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| ·大肠杆菌在仔猪腹泻症状中扮演着重要角色 | 第61页 |
| ·大肠杆菌在仔猪腹泻症状中扮演着重要角色 | 第61-62页 |
| ·致病性大肠杆菌的实验室诊断方法比较 | 第62页 |
| ·致病性大肠杆菌二重PCR检测方法的效果分析 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
