| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 花生和花生病毒病 | 第12-14页 |
| ·花生的经济重要性 | 第12页 |
| ·花生病毒病 | 第12-14页 |
| ·花生病毒病的概况 | 第12-13页 |
| ·我国花生病毒病的特点 | 第13-14页 |
| 2 侵染花生的两种黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)病毒 | 第14-22页 |
| ·黄瓜花叶病毒属 | 第14页 |
| ·黄瓜花叶病毒 | 第14-19页 |
| ·分类地位和亚组划分 | 第15-16页 |
| ·基因组的组成与结构 | 第16-17页 |
| ·蛋白质的功能 | 第17页 |
| ·变异和进化 | 第17-18页 |
| ·蚜传机制 | 第18-19页 |
| ·花生矮化病毒 | 第19-22页 |
| ·基因组的结构和功能 | 第19-20页 |
| ·病毒株系和亚组 | 第20-21页 |
| ·PSV的变异 | 第21-22页 |
| 3 植物转基因病毒抗性 | 第22-24页 |
| ·RNA沉默的发现 | 第22-23页 |
| ·RNA沉默的机制 | 第23-24页 |
| ·RNA沉默的应用 | 第24页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 花生矮化病毒基因组克隆和全序列分析 | 第26-40页 |
| 1 引言 | 第26页 |
| 2 实验材料 | 第26页 |
| ·病毒 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| 3 实验方法 | 第26-29页 |
| ·病毒提纯 | 第26-27页 |
| ·病毒RNA提取 | 第27页 |
| ·病毒RNAs的RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·病毒RNAs的5'终端片段扩增采用5'-Race方法 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR扩增病毒RNAs的cDNA | 第28页 |
| ·PCR产物回收 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第28页 |
| ·电击转化 | 第28页 |
| ·质粒小量提取 | 第28-29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29页 |
| ·cDNA的序列测定 | 第29页 |
| ·cDNA序列的计算机分析 | 第29页 |
| 4 实验结果 | 第29-35页 |
| ·5'Race的结果 | 第29页 |
| ·PSV RNAs cDNA的克隆和鉴定 | 第29-30页 |
| ·PSV全序列结果 | 第30-35页 |
| ·病毒核酸大小和结构分析 | 第30-34页 |
| ·PSV-Mi与其它PSV株系基因组结构的比较 | 第34-35页 |
| ·PSV与相关病毒核苷酸和氨基酸序列同源性的比较 | 第35页 |
| ·系统进化树绘制 | 第35页 |
| 5 讨论和分析 | 第35-40页 |
| 第三章 侵染花生的两个黄瓜花叶病毒株系基因组克隆和全序列分析 | 第40-63页 |
| 1 引言 | 第40页 |
| 2 实验材料 | 第40页 |
| ·病毒材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| 3 实验方法 | 第40-42页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·cDNA合成 | 第41-42页 |
| ·cDNA克隆和鉴定参照上一章PSV-Mi的实验方法 | 第42页 |
| ·序列测定、序列同源性比较和系统进化树的绘制 | 第42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-56页 |
| ·CMV-CA和CS基因组的RT-PCR扩增及克隆 | 第43-44页 |
| ·CMV-CA和CS基因组的核苷酸序列及蛋白翻译 | 第44-50页 |
| ·核苷酸、氨基酸序列同源性比较 | 第50-52页 |
| ·CA和CS与CMV不同亚组株系RNA3的5'NTRs结构比较 | 第52-53页 |
| ·基因组编码的5个ORFs核苷酸序列的系统进化树分析 | 第53-56页 |
| 5 讨论 | 第56-63页 |
| 第四章 单价和多价反向重复序列载体的构建和转基因抗性研究 | 第63-86页 |
| 1 引言 | 第63页 |
| 2 实验材料 | 第63-64页 |
| ·质粒和菌株 | 第63-64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·植物材料 | 第64页 |
| ·毒源 | 第64页 |
| ·抗体 | 第64页 |
| ·引物 | 第64页 |
| 3 实验方法 | 第64-69页 |
| ·拼接PCR | 第64-65页 |
| ·拼接片段或PCR产物克隆至pGEM-Teasy载体 | 第65页 |
| ·BP重组反应 | 第65-66页 |
| ·LR重组反应 | 第66页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备及电击转化 | 第66页 |
| ·烟草的转化 | 第66页 |
| ·基因组DNA的小量提取 | 第66-67页 |
| ·基因组DNA的PCR扩增 | 第67页 |
| ·转基因植株的抗病性检测 | 第67页 |
| ·转基因植株的siRNA的提取 | 第67-68页 |
| ·siRNA的Northern-blot | 第68-69页 |
| ·siRNA电泳 | 第68页 |
| ·siRNA转膜 | 第68页 |
| ·探针制备 | 第68页 |
| ·siRNA杂交 | 第68-69页 |
| 4 实验结果 | 第69-83页 |
| ·拼接PCR | 第69-70页 |
| ·将3种病毒150bp片段拼接为450bp片段。 | 第69-70页 |
| ·将3种病毒500bp片段拼接为1500bp片段。 | 第70页 |
| ·拼接片段或者PStV cp基因克隆至pGEM-Teasy载体 | 第70-71页 |
| ·450bp拼接片段克隆至pGEM-Teasy载体并鉴定 | 第70-71页 |
| ·PStV cp克隆至pGEM-Teasy载体并鉴定 | 第71页 |
| ·1500bp拼接片段克隆至pGEM-Teasy载体并鉴定 | 第71页 |
| ·BP重组 | 第71-74页 |
| ·pDONR450的鉴定 | 第72-73页 |
| ·pDONRcp的鉴定 | 第73页 |
| ·pDONP1500的鉴定 | 第73-74页 |
| ·LR重组 | 第74-77页 |
| ·pK450的鉴定 | 第74-75页 |
| ·pKcp的鉴定 | 第75-76页 |
| ·pK1500的鉴定 | 第76-77页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第77页 |
| ·转基因烟草对病毒的抗性检测 | 第77-81页 |
| ·转基因烟草T0代的抗性检测 | 第78-79页 |
| ·转基因烟草T1代的抗性检测 | 第79-81页 |
| ·转基因烟草T2代的抗性检测 | 第81页 |
| ·转基因烟草的siRNA检测 | 第81-83页 |
| 5 讨论 | 第83-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 作者简介 | 第97页 |
