| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-18页 |
| 1 板栗疫病与板栗疫病菌 | 第9-10页 |
| 2 低毒病毒 | 第10-15页 |
| ·低毒病毒的发现 | 第10页 |
| ·低毒病毒的类群 | 第10-12页 |
| ·低毒病毒的分子生物学研究 | 第12-13页 |
| ·低毒病毒与板栗疫病菌相互作用研究 | 第13-15页 |
| ·与低毒力相关的蛋白酶 | 第13-14页 |
| ·G蛋白信号传导对真菌毒力的影响 | 第14-15页 |
| 3 EST表达序列标签及其在病毒／宿主相互作用研究上的应用 | 第15页 |
| 4 DNA芯片技术及其在研究病毒／宿主相互作用上的应用 | 第15-16页 |
| 5 板栗疫病菌EST与cDNA芯片研究现状 | 第16页 |
| 6 课题研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 产孢期板栗疫病菌cDNA文库的构建及数据分析 | 第18-37页 |
| 1 材料和方法 | 第18-27页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·溶液及缓冲液、试剂 | 第18-19页 |
| ·产孢期板栗疫病菌的培养 | 第19页 |
| ·总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第20页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第20-23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增cDNA | 第21页 |
| ·蛋白酶K消化 | 第21页 |
| ·双酶切反应 | 第21-22页 |
| ·去除cDNA小片段 | 第22页 |
| ·重组质粒的连接 | 第22页 |
| ·甘油法制备E.coli的感受态细胞 | 第22-23页 |
| ·重组质粒电转化大肠杆菌DH5α | 第23页 |
| ·细菌培养 | 第23页 |
| ·质粒的提取 | 第23-24页 |
| ·测序 | 第24页 |
| ·序列校正 | 第24页 |
| ·EST数据库的建立 | 第24-27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-34页 |
| ·产孢期板栗疫病菌的特征 | 第27页 |
| ·产孢期板栗疫病菌cDNA文库的构建 | 第27-28页 |
| ·总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA文库的质量 | 第28页 |
| ·产孢期板栗疫病菌EST数据总体分析 | 第28-29页 |
| ·产孢期EP155与EP713 EST的比较 | 第29-30页 |
| ·已知功能板栗疫病菌序列的鉴定 | 第30-31页 |
| ·产孢期板栗疫病菌EST数据的功能注释 | 第31页 |
| ·产孢期板栗疫病菌EST数据的功能分类 | 第31-33页 |
| ·不同发育时期板栗疫病菌EST库的比较 | 第33页 |
| ·有关发育，繁殖和产孢基因的鉴定 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-37页 |
| ·板栗疫病菌EST数据库 | 第34-35页 |
| ·两个发育不同时期板栗疫病菌EST序列的比较 | 第35页 |
| ·有关产孢期板栗疫病菌感染病毒前后EST序列的比较 | 第35-36页 |
| ·本实验室板栗疫病菌EST数据与已发表板栗疫病菌EST数据的比较 | 第36-37页 |
| 第三章 利用板栗疫病菌cDNA芯片检测板栗疫病菌基因表达谱 | 第37-59页 |
| 1 材料与方法 | 第37-42页 |
| ·基因材料来源 | 第37页 |
| ·酶及主要试剂 | 第37页 |
| ·cDNA芯片探针的制备 | 第37-38页 |
| ·板栗疫病菌的培养 | 第37页 |
| ·总RNA的提取 | 第37页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第37页 |
| ·探针的标记 | 第37-38页 |
| ·cDNA芯片制备 | 第38页 |
| ·cDNA芯片杂交 | 第38-39页 |
| ·cDNA芯片数据提取及分析方法 | 第39-40页 |
| ·荧光定量PCR验证cDNA芯片结果 | 第40-42页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第40-41页 |
| ·荧光定量PCR | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-54页 |
| ·一般生长期板栗疫病菌的特征 | 第42页 |
| ·总RNA质量分析 | 第42页 |
| ·cDNA芯片均一性分析 | 第42-43页 |
| ·cDNA芯片杂交结果及分析 | 第43-52页 |
| ·荧光定量PCR验证cDNA芯片检测结果的比较 | 第52-54页 |
| 3 讨论 | 第54-59页 |
| ·非产孢时期EP155与EP713基因表达差异 | 第54页 |
| ·芯片结果可信度问题 | 第54-55页 |
| ·病毒对宿主基因表达的调控 | 第55-56页 |
| ·一些新的可能因子和靶标 | 第56-59页 |
| ·核糖体蛋白(Ribosomal protein) | 第56-57页 |
| ·真核翻译起始因子(Eukaryotic translation initiation factor) | 第57页 |
| ·延伸因子(Elongation factor) | 第57-59页 |
| 全文小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
