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水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定

中文摘要第1-8页
Abstract第8-11页
1 前言第11-29页
   ·蕨类概述第11-17页
     ·蕨类植物的分类地位与分布第11页
     ·蕨类的分子生物学研究进展第11-12页
     ·蕨类的应用第12-14页
     ·水蕨第14-17页
   ·SOD 概述第17-24页
     ·SOD 的种类与分布第17-18页
     ·SOD 的功能第18-20页
     ·SOD 的应用第20-21页
     ·含铁型超氧化物岐化酶(Fe-SOD)第21-24页
   ·植物中SOD 基因工程进展第24-26页
   ·本论文的研究目的和意义第26-29页
2. 材料和方法第29-47页
   ·材料第29-32页
     ·本实验采用的蕨类第29页
     ·本实验采用的质粒第29页
     ·本实验采用的菌株第29页
     ·本实验构建的质粒第29-30页
     ·本实验所用试剂及酶第30-31页
     ·本实验所用仪器设备第31-32页
   ·方法第32-47页
     ·水蕨配子体的培养第32页
     ·水蕨总RNA 的提取第32-33页
     ·保守片段cDNA 序列的获得第33-35页
     ·RACE 获得全长cDNA 序列第35-43页
     ·目的基因在大肠杆菌中的表达第43-44页
     ·蛋白定量(Bradford,1976)第44页
     ·SDS-PAGE 检测第44-45页
     ·包涵体蛋白的可溶性处理及抗原制备第45-46页
     ·胁迫处理第46页
     ·Western Blotting 检测第46-47页
3. 结果与分析第47-61页
   ·水蕨的培养第47页
   ·水蕨总RNA 的提取第47-48页
   ·Fe-SOD 核心片段的获得第48-49页
     ·PCR 扩增Fe-SOD 核心片段第48页
     ·PMD19-T-SOD 载体的构建及同源性分析第48-49页
   ·RACE 获得全长cDNA 序列第49-53页
     ·PCR 扩增Fe-SOD 5’端第50-51页
     ·PMD19-T-FeSOD5’载体的构建及同源性分析第51-52页
     ·PCR 扩增Fe-SOD 3’端第52页
     ·PMD19-T-FeSOD3’载体的构建及同源性分析第52-53页
     ·Fe-SOD 全长cDNA 序列的获得第53页
   ·pET32a-FeSOD 载体的构建第53-54页
   ·生物信息学分析第54-56页
     ·同源性分析第54-56页
   ·pET32a-FeSOD 基因在大肠杆菌中的表达第56页
   ·pET32a-FeSOD 重组蛋白的纯化第56-57页
   ·重组蛋白Pet32a-FeSOD 的验证第57-58页
   ·低温胁迫环境下水蕨中Fe-SOD 的表达第58-59页
   ·不同光强胁迫环境下水蕨中Fe-SOD 的表达第59-61页
4. 讨论第61-69页
   ·Fe-SOD 的分布与进化第61-64页
   ·强光胁迫对蕨类植物的影响第64-66页
   ·低温胁迫对蕨类植物的影响第66-69页
5. 总结和展望第69-73页
参考文献第73-83页
致谢第83-85页
攻读学位期间的研究成果第85页

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