| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-25页 |
| ·猪流感概述 | 第16-17页 |
| ·猪流感病原学 | 第17-19页 |
| ·猪流感病毒形态结构 | 第17页 |
| ·猪流感病毒基因组的结构及其编码的蛋白 | 第17-18页 |
| ·猪流感病毒的复制 | 第18-19页 |
| ·流感病毒反向遗传学研究进展 | 第19-22页 |
| ·借助辅助病毒拯救流感病毒 | 第19-20页 |
| ·核蛋白转染法 | 第19页 |
| ·RNA 聚合酶Ⅰ法 | 第19-20页 |
| ·由克隆的基因拯救流感病毒 | 第20-22页 |
| ·反义 RNA 聚合酶Ⅰ法，即 17(或 12)质粒系统 | 第20页 |
| ·单向 RNA 聚合酶Ⅰ/Ⅱ转染系统，即 cRNA 法 | 第20页 |
| ·双向 RNA 聚合酶Ⅰ/Ⅱ转染系统，即 8 质粒系统 | 第20-21页 |
| ·双向 RNA 聚合酶 I／II 转录系统，即 l／4 质粒系统 | 第21-22页 |
| ·猪流感疫苗的研究进展 | 第22-24页 |
| ·全病毒灭活苗 | 第22页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第22-23页 |
| ·亚单位疫苗 | 第23页 |
| ·病毒活载体疫苗 | 第23页 |
| ·核酸疫苗 | 第23-24页 |
| ·反向遗传操作技术在流感病毒重组疫苗株构建中的应用 | 第24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 H1N2 亚型猪流感病毒遗传演化分析 | 第25-48页 |
| ·材料方法 | 第25-26页 |
| ·毒株，菌种和细胞 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·病毒增殖 | 第26页 |
| ·病毒 HA 效价的确定 | 第26页 |
| ·病毒 EID50的测定 | 第26-27页 |
| ·病毒 TCID50的测定 | 第27页 |
| ·主要试剂引物设计 | 第27页 |
| ·病毒 RNA 的提取及 RT-PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物的回收纯化及与 pMD-18T 载体的连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的鉴定和序列分析 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-38页 |
| ·分离的病毒 HA 效价，EID50，TCID5014 | 第29页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第29-30页 |
| ·病毒基因组序列测定及分析比较结果 | 第30-38页 |
| ·HA 基因的分析 | 第30-31页 |
| ·NA 基因的分析 | 第31-32页 |
| ·PB1 基因的分析 | 第32-33页 |
| ·PB2 基因的分析 | 第33-34页 |
| ·PA 基因的分析 | 第34-35页 |
| ·M 基因的分析 | 第35-36页 |
| ·NS 基因的分析 | 第36-37页 |
| ·NP 基因的分析 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-48页 |
| 第三章 ：重组 H1N1，H1N2 流感病毒的拯救及其小鼠致病性的分析比较 | 第48-60页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·毒株与质粒 | 第49页 |
| ·菌种，细胞和实验动物 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-54页 |
| ·主要试剂引物设计 | 第49-50页 |
| ·病毒 RNA 的提取及 RT-PCR 扩增 | 第50页 |
| ·重组质粒的构建、鉴定及纯化 | 第50-52页 |
| ·PCR 产物回收纯化 | 第50页 |
| ·各基因片段及载体的酶切处理 | 第50-51页 |
| ·目的基因和载体的连接 | 第51页 |
| ·连接产物的转化 | 第51页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第51页 |
| ·重组质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·病毒的拯救 | 第52-54页 |
| ·转染 | 第52页 |
| ·病毒的获救 | 第52页 |
| ·获救病毒的鉴定 | 第52-53页 |
| ·拯救的病毒 EID50的测定 | 第53页 |
| ·拯救的病毒 TCID50的测定 | 第53页 |
| ·三株流感病毒小鼠致病力的评价 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·RT-PCR 扩增产物的鉴定结果 | 第54-55页 |
| ·重组 PBD 阳性质粒鉴定结果 | 第55页 |
| ·拯救病毒的鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·三株病毒 EID50的测定结果 | 第56页 |
| ·三株病毒 TCID50的测定结果 | 第56页 |
| ·小鼠致病致病性分析比较 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 ：重组 H1N1 灭活疫苗的制备及保护力评价 | 第60-70页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·毒株、菌株及疫苗毒株 | 第60-61页 |
| ·鸡胚和实验动物 | 第61页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-64页 |
| ·免疫原的制备 | 第61页 |
| ·动物实验 | 第61-62页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清中特异性 IgG 抗体水平 | 第62-63页 |
| ·HI 和 NT 分别检测小鼠血清中 HI 抗体和中和抗体水平 | 第63页 |
| ·小鼠肺脏病毒滴度测定 | 第63页 |
| ·小鼠肺组织病理学观察 | 第63页 |
| ·统计学分析 | 第63-64页 |
| ·结果 | 第64-68页 |
| ·ELISA 检测 r09SZ 特异性抗体结果 | 第64页 |
| ·HI 和 NT 实验结果 | 第64-65页 |
| ·攻毒后小鼠肺脏滴定结果 | 第65-66页 |
| ·SPF 鸡胚病毒滴定检测小鼠肺脏病毒含量 | 第66-67页 |
| ·小鼠肺脏病理切片 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 ：全文结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
