| 致谢 | 第1-9页 |
| 缩略语表 | 第9-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 第一篇 文献综述 | 第16-43页 |
| 第一章 双生病毒的致病机制研究进展 | 第16-29页 |
| 1 双生病毒的分类及其基因组结构 | 第16-19页 |
| 1．1 Mastrevirus属 | 第17页 |
| 1．2 Curtovirus属 | 第17页 |
| 1．3 Topocuvirus属 | 第17页 |
| 1．4 Begomovirus属 | 第17-19页 |
| 2 双生病毒与小分子DNA形成病害复合体 | 第19-21页 |
| 2．1 类似Nanovirus属病毒的DNA1与双生病毒相伴随 | 第19页 |
| 2．2 DNAβ与双生病毒相伴随 | 第19-20页 |
| 2．3 双生病毒与小分子DNA形成病毒复合体 | 第20-21页 |
| 3 双生病毒的系统侵染过程 | 第21-26页 |
| 3．1 双生病毒的复制 | 第21-22页 |
| 3．1．1 激活寄主细胞周期 | 第21-22页 |
| 3．1．2 合成ssDNA | 第22页 |
| 3．2 双生病毒的转录 | 第22-23页 |
| 3．3 双生病毒的移动 | 第23-25页 |
| 3．3．1 双组分双生病毒的移动 | 第23页 |
| 3．3．2 单组分双生病毒的移动 | 第23-25页 |
| 3．4 包壳和传毒 | 第25-26页 |
| 4 双生病毒的致病因子及其可能的作用途径 | 第26-29页 |
| 4．1 调控细胞周期与病毒致病性的关系 | 第26页 |
| 4．2 干扰细胞运动与病毒致病性的关系 | 第26-27页 |
| 4．3 抑制基因沉默与病毒致病性的关系 | 第27-29页 |
| 第二章 植物病毒作为载体系统的应用进展 | 第29-43页 |
| 1 植物病毒作为外源基因表达载体系统的应用 | 第29-36页 |
| 1．1 植物病毒表达载体的建立 | 第29-30页 |
| 1．2 植物病毒表达载体的优点 | 第30页 |
| 1．3 植物病毒表达载体的构建策略 | 第30-33页 |
| 1．3．1 基因置换 | 第30-31页 |
| 1．3．2 基因插入 | 第31-32页 |
| 1．3．3 融合抗原 | 第32-33页 |
| 1．3．4 基因互补 | 第33页 |
| 1．3．5 融合／释放 | 第33页 |
| 1．4 双生病毒作为表达载体的发展及其应用 | 第33-35页 |
| 1．5 面临的问题及展望 | 第35-36页 |
| 2 植物病毒诱导的基因沉默及在植物基因功能研究中的应用 | 第36-43页 |
| 2．1 VIGS体系的建立和发展 | 第36-39页 |
| 2．1．1 RNA病毒诱导的VIGS | 第36-37页 |
| 2．1．2 DNA病毒诱导的VIGS | 第37-38页 |
| 2．1．3 RNA卫星诱导的VIGS | 第38页 |
| 2．1．4 DNA卫星诱导的VIGS | 第38-39页 |
| 2．2 VIGS的机制 | 第39-40页 |
| 2．3 VIGS中靶基因片段的选取 | 第40-41页 |
| 2．4 利用VIGS体系研究植物基因功能的优劣 | 第41-42页 |
| 2．4．1 VIGS的优势 | 第41页 |
| 2．4．2 VIGS的不足 | 第41-42页 |
| 2．5 展望 | 第42-43页 |
| 第二篇 研究内容 | 第43-103页 |
| 第一章 材料与方法 | 第43-53页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| 1．1 植物材料 | 第43页 |
| 1．2 菌株和质粒 | 第43页 |
| 1．3 试剂与仪器 | 第43页 |
| 1．4 常用缓冲液的配制 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-53页 |
| 2．1 PCR技术 | 第43-45页 |
| 2．1．1 普通PCR反应 | 第44页 |
| 2．1．2 免疫捕获PCR反应 | 第44页 |
| 2．1．3 RT-PCR反应 | 第44-45页 |
| 2．2 PCR产物纯化 | 第45页 |
| 2．3 DNA克隆技术 | 第45-46页 |
| 2．3．1 载体的去磷酸化 | 第45页 |
| 2．3．2 连接 | 第45-46页 |
| 2．3．3 感受态细胞制备 | 第46页 |
| 2．3．4 转化 | 第46页 |
| 2．4 重组质粒的提取与鉴定 | 第46-48页 |
| 2．4．1 碱裂解法 | 第46-47页 |
| 2．4．2 质粒微量提取试剂盒 | 第47-48页 |
| 2．4．3 PCR鉴定 | 第48页 |
| 2．4．4 酶切鉴定 | 第48页 |
| 2．5 植物总DNA提取和Southern印迹分析 | 第48-50页 |
| 2．5．1 总DNA提取(CTAB法) | 第48页 |
| 2．5．2 电泳及转膜 | 第48-49页 |
| 2．5．3 探针标记 | 第49-50页 |
| 2．5．4 预杂交和杂交 | 第50页 |
| 2．6 植物总RNA提取 | 第50-51页 |
| 2．6．1 器皿和容器的处理 | 第50页 |
| 2．6．2 植物总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 2．7 SDS-PAGE与Western印迹分析 | 第51-53页 |
| 2．7．1 植物可溶性蛋白样品的制备 | 第51页 |
| 2．7．2 SDS-PAGE | 第51页 |
| 2．7．3 电转移 | 第51-52页 |
| 2．7．4 Western印迹分析 | 第52-53页 |
| 第二章 中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNAβ的βC1基因缺失突变体的致病性及其稳定性 | 第53-69页 |
| 1 材料与方法 | 第53-57页 |
| 1．1 毒源 | 第53-54页 |
| 1．2 侵染性克隆 | 第54页 |
| 1．3 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β的侵染性克隆构建 | 第54-56页 |
| 1．4 根癌土壤杆菌接种 | 第56-57页 |
| 1．5 PCR和Southern印迹分析 | 第57页 |
| 1．6 免疫捕获PCR | 第57页 |
| 1．7 序列测定和分析 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-67页 |
| 2．1 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β的侵染性克隆构建 | 第57-58页 |
| 2．2 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β的侵染性测定 | 第58-60页 |
| 2．3 Y10 DNAΔC1β对TYLCCNV-Y10复制的影响 | 第60-61页 |
| 2．4 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β复制的稳定性 | 第61-62页 |
| 2．5 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β的包壳 | 第62-63页 |
| 2．6 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β与其它异源双生病毒的作用 | 第63-67页 |
| 2．6．1 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β与其它辅助双生病毒的侵染性测定 | 第63-64页 |
| 2．6．2 TYLCCNV-Y10 DNAΔC1β与其它辅助双生病毒作用时的稳定性测定 | 第64-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 第三章 烟草曲茎病毒卫星DNAβ的βC1基因缺失突变体的致病性及其稳定性 | 第69-82页 |
| 1 材料与方法 | 第69-72页 |
| 1．1 毒源 | 第69页 |
| 1．2 TbCSV-Y35 DNAΔC1β侵染性克隆构建 | 第69-71页 |
| 1．3 根癌土壤杆菌接种 | 第71页 |
| 1．4 PCR和Southern印迹分析 | 第71-72页 |
| 1．5 免疫捕获PCR | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-80页 |
| 2．1 TbCSV-Y35 DNAΔC1β侵染性克隆构建 | 第72-73页 |
| 2．2 TbCSV-Y35 DNAΔC1β侵染性克隆的侵染性测定 | 第73页 |
| 2．3 Y35 DNAΔC1β对TbCSV复制的影响 | 第73-74页 |
| 2．4 TbCSV-Y35 DNAΔC1β复制的稳定性 | 第74-78页 |
| 2．5 TbCSV-Y35 DNAΔC1β的包壳 | 第78页 |
| 2．6 TbCSV-Y35 DNAΔC1β与异源双生病毒的作用 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 第四章 利用中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNAβ的βC1基因缺失突变体进行外源基因表达 | 第82-92页 |
| 1 材料与方法 | 第82-84页 |
| 1．1 侵染性克隆 | 第82页 |
| 1．2 抗血清 | 第82页 |
| 1．3 基因表达载体的构建 | 第82-83页 |
| 1．4 叶盘法检测病毒基因组的瞬时复制 | 第83-84页 |
| 1．5 PCR和Southern印迹分析 | 第84页 |
| 1．6 RT-PCR | 第84页 |
| 1．7 Western印迹分析 | 第84页 |
| 2 结果与分析 | 第84-90页 |
| 2．1 TMV CP基因的表达 | 第84-89页 |
| 2．1．1 TMV CP基因的复制 | 第85-86页 |
| 2．1．2 TMV CP基因的转录 | 第86页 |
| 2．1．3 TMV CP基因的表达 | 第86-87页 |
| 2．1．4 TMV CP基因片段插入DNAΔC1β载体的稳定性 | 第87-89页 |
| 2．2 GUS基因的表达 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-92页 |
| 第五章 烟草曲茎病毒的卫星DNA沉默载体构建及其利用 | 第92-103页 |
| 1 材料与方法 | 第92-95页 |
| 1．1 转GFP本氏烟 | 第92页 |
| 1．2 基因沉默载体的构建 | 第92-93页 |
| 1．3 根癌土壤杆菌接种 | 第93-94页 |
| 1．4 DNA提取及Southern blot杂交 | 第94页 |
| 1．5 半定量RT-PCR | 第94页 |
| 1．6 GFP荧光检测与成像 | 第94-95页 |
| 2 结果 | 第95-99页 |
| 2．1 用DNAΔC1β载体沉默GFP基因 | 第95页 |
| 2．2 用DNAΔC1β载体沉默Su基因 | 第95页 |
| 2．3 DNAΔC1β载体沉默基因后对基因内源mRNA积累量的影响 | 第95-98页 |
| 2．4 DNAΔC1β载体沉默基因后对病毒积累量的影响 | 第98-99页 |
| 2．5 DNAΔC1β载体与多种异源双生病毒诱导基因沉默 | 第99页 |
| 2．5．1 中国番茄黄化曲叶病毒 | 第99页 |
| 2．5．2 赛葵黄脉病毒 | 第99页 |
| 3 讨论 | 第99-103页 |
| 全文小结 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-117页 |
| 附录A：常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第117-118页 |
| 附录B：常用缓冲液及培养基配方 | 第118-122页 |
