| 致谢 | 第1-8页 |
| 缩略语 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计方案 | 第13-44页 |
| 第一章 乙肝病毒表面抗原及其基因工程疫苗的研究进展 | 第14-24页 |
| ·HBsAg基因结构 | 第14-16页 |
| ·HBsAg的功能 | 第16-17页 |
| ·HBV感染的机理及乙肝疫苗的重要性 | 第17-18页 |
| ·乙肝疫苗的现状 | 第18页 |
| ·口服乙肝疫苗的研究进展 | 第18-21页 |
| ·利用昆虫杆状病毒表达载体系统生产乙肝疫苗的研究 | 第21-22页 |
| ·基因工程乙肝疫苗的发展方向 | 第22-24页 |
| 第二章 霍乱毒素B亚单位的研究进展 | 第24-32页 |
| ·霍乱弧菌(V.cholerae)和霍乱毒素 | 第24-25页 |
| ·霍乱弧菌 | 第24页 |
| ·霍乱毒素 | 第24-25页 |
| ·霍乱毒素B亚单位的基因表达 | 第25-26页 |
| ·霍乱毒素B亚单位的应用 | 第26-28页 |
| ·载体蛋白 | 第26页 |
| ·免疫佐剂 | 第26页 |
| ·口服及鼻内免疫蛋白 | 第26-27页 |
| ·CTB与免疫原不同使用方法和不同的免疫途径对其免疫佐剂作用的影响 | 第27-28页 |
| ·霍乱毒素B亚单位的研究进展 | 第28-32页 |
| ·融合表达研究 | 第28-29页 |
| ·口服免疫研究 | 第29-30页 |
| ·鼻内免疫研究 | 第30-32页 |
| 第三章 杆状病毒表达载体系统 | 第32-42页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统的基本原理 | 第32-33页 |
| ·转移载体 | 第33-34页 |
| ·转移载体的启动子 | 第33-34页 |
| ·多角体蛋白融合表达的转移载体 | 第34页 |
| ·便于纯化表达产物的的转移载体 | 第34页 |
| ·多元转移载体 | 第34页 |
| ·重组病毒筛选方法的改进 | 第34-38页 |
| ·线性化病毒DNA技术 | 第35-36页 |
| ·应用YAC操作杆状病毒基因组 | 第36-37页 |
| ·E.coli Bacmid系统(转座子介导的E.coli-昆虫细胞穿梭载体) | 第37页 |
| ·体外定点重组 | 第37页 |
| ·neo抗性筛选 | 第37-38页 |
| ·条件致死性筛选 | 第38页 |
| ·产生多角体的重组病毒 | 第38页 |
| ·影响昆虫系统表达量的因素分析 | 第38-40页 |
| ·细胞类型与质量 | 第39页 |
| ·外源蛋白的性质 | 第39页 |
| ·启动子序列完整性 | 第39页 |
| ·融合蛋白 | 第39-40页 |
| ·其他因素 | 第40页 |
| ·杆状病毒表达载体系统的特点分析 | 第40-42页 |
| ·高效表达外源基因 | 第40页 |
| ·表达产物后加工比较完全 | 第40-41页 |
| ·可容纳较大的外源DNA片段 | 第41页 |
| ·适合表达细胞毒性蛋白 | 第41页 |
| ·安全性好 | 第41-42页 |
| 第四章 实验设计方案 | 第42-44页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第42页 |
| ·本研究的主要内容 | 第42-43页 |
| ·技术路线 | 第43-44页 |
| 第二部分 研究内容 | 第44-84页 |
| 第五章 家蚕杆状病毒重组转移载体的构建 | 第45-62页 |
| ·材料和试剂 | 第45-47页 |
| ·实验方法 | 第47-56页 |
| ·以pBlue-CTB质粒为模板扩增CTB目的片段 | 第47-48页 |
| ·低熔点胶回收CTB PCR产物 | 第48-49页 |
| ·重组载体pBacPAK8-CTB的制备 | 第49页 |
| ·连接反应 | 第49-50页 |
| ·E.coli TG1感受态细胞的制备 | 第50页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第50页 |
| ·碱法小批量抽提质粒DNA | 第50-51页 |
| ·重组质粒pBacPAK8-CTB的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·重组质粒pBacPAK8-CTB的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·基因序列测定 | 第52页 |
| ·以pBacPAK-HBM质粒为模板扩增PreS2-S目的片段 | 第52-53页 |
| ·低熔点胶回收HBM PCR产物 | 第53页 |
| ·重组转移载体pBacPAK8-CTB-HBM的构建 | 第53-54页 |
| ·重组转移载体pBacPAK8-CTB-HBM的酶切鉴定 | 第54页 |
| ·重组转移载体pBacPAK8-CTB-HBM的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| ·用High pure plasmid Isolation Kit纯化重组质粒 | 第55-56页 |
| ·核酸电泳 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·重组转移载体pBacPAK-CTB-HBM的构建 | 第56-58页 |
| ·重组转移载体的鉴定 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 重组家蚕杆状病毒的筛选和鉴定 | 第62-73页 |
| ·材料和试剂 | 第62-63页 |
| ·试验方法 | 第63-70页 |
| ·细胞培养、冻存与复苏 | 第63-64页 |
| ·病毒培养 | 第64页 |
| ·病毒滴度测定 | 第64-65页 |
| ·Bm-BacPAK6 DNA酶切线性化 | 第65页 |
| ·重组转移质粒与线性化病毒DNA共转染 | 第65-66页 |
| ·重组病毒的筛选 | 第66页 |
| ·重组病毒的DNA Southern杂交鉴定 | 第66-70页 |
| ·结果 | 第70-73页 |
| ·线型化病毒Bm-BacPAK 6的基因组DAN提取和线性化 | 第70-71页 |
| ·共转染及重组病毒的筛选 | 第71页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第71-72页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第72-73页 |
| 第七章 霍乱毒素B亚基与乙肝中蛋白融合蛋白在家蚕细胞、幼虫和蛹中的表达及活性分析 | 第73-84页 |
| ·材料和试剂 | 第73-75页 |
| ·实验方法 | 第75-78页 |
| ·重组病毒在家蚕培养细胞和5龄幼虫和蛹中的表达 | 第75-76页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE | 第76页 |
| ·表达产物的ELISA检测 | 第76-77页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第77-78页 |
| ·动物免疫实验 | 第78页 |
| ·结果 | 第78-83页 |
| ·重组融合蛋白的表达 | 第78-80页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE和Western印迹 | 第80-81页 |
| ·重组蛋白免疫原性 | 第81-83页 |
| ·讨论 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-98页 |
