| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-35页 |
| ·组织工程 | 第14-18页 |
| ·组织工程的概念 | 第14-15页 |
| ·组织工程学的产生 | 第15-16页 |
| ·组织工程学的研究现状 | 第16-18页 |
| ·骨组织工程的研究现状 | 第18-24页 |
| ·种子细胞—成骨细胞的研究现状 | 第18-21页 |
| ·材料的研究现状 | 第21-22页 |
| ·调节信号—生长因子研究现状 | 第22-24页 |
| ·bFGF与骨组织工程 | 第24-33页 |
| ·bFGF研究现状 | 第24页 |
| ·bFGF的作用机制 | 第24页 |
| ·bFGF的生物学特性 | 第24-26页 |
| ·bFGF在组织工程中的应用研究 | 第26-28页 |
| ·bFGF基因转移用于骨组织工程学中的分子生物学基础 | 第28-30页 |
| ·基因转移技术研究现状 | 第30-33页 |
| 本课题的研究意义 | 第33-34页 |
| 本课题研究的主要内容 | 第34-35页 |
| 第二章 bFGF真核表达载体的构建及其在成纤维细胞中的表达 | 第35-56页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35-38页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·培养基和溶液 | 第36-37页 |
| ·主要仪器和设备 | 第37-38页 |
| ·技术路线 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-44页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第38页 |
| ·质粒 DNA的提取方法 | 第38-39页 |
| ·DNA浓度的测定 | 第39页 |
| ·bFGF基因的获得 | 第39-40页 |
| ·PCR产物及载体的酶切 | 第40页 |
| ·酶切产物的回收 | 第40-41页 |
| ·酶切产物的体外连接 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第42页 |
| ·转化子的快速鉴定 | 第42页 |
| ·DNA序列测定 | 第42页 |
| ·贴壁细胞传代培养 | 第42页 |
| ·脂质体转染法 | 第42-43页 |
| ·免疫组化鉴定bFGF的表达 | 第43页 |
| ·ELISA法鉴定bFGF的表达 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-55页 |
| ·引物的设计 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增bFGF结果 | 第45页 |
| ·bFGF基因重组表达质粒的构建 | 第45-53页 |
| ·绿色荧光蛋白表达 | 第53页 |
| ·免疫组化分析结果 | 第53-54页 |
| ·ELISA检测bFGF分泌表达 | 第54-55页 |
| 本章小结 | 第55-56页 |
| 第三章 重组bFGF真核表达质粒转染成骨细胞的研究 | 第56-91页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第56页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·试剂盒 | 第56-57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·培养液和溶液 | 第57-59页 |
| ·主要仪器和设备 | 第59页 |
| ·技术路线 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-68页 |
| ·成骨细胞的分离培养 | 第60页 |
| ·成骨细胞鉴定方法 | 第60-61页 |
| ·成骨细胞生长曲线测定方法 | 第61页 |
| ·bFGF重组质粒转染成骨细胞的方法 | 第61-62页 |
| ·转染效率测定 | 第62页 |
| ·成骨细胞染色体 DNA的提取 | 第62页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE电泳分析 | 第62-63页 |
| ·western-blot鉴定表达产物 | 第63页 |
| ·RT-PCR法鉴定bFGF的mRNA的表达 | 第63-65页 |
| ·ELISA法鉴定bFGF的表达 | 第65页 |
| ·免疫组化鉴定bFGF的表达 | 第65页 |
| ·MTT法测定表达的bFGF的生物学活性 | 第65页 |
| ·碱性磷酸酶的定性检测 | 第65-66页 |
| ·碱性磷酸酶的定量检测 | 第66页 |
| ·骨钙素的定量检测 | 第66-67页 |
| ·胶原蛋白 Ⅰ型蛋白的提取方法 | 第67-68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-89页 |
| ·分离成骨细胞的方法比较 | 第68-71页 |
| ·分离培养的成骨细胞鉴定 | 第71-73页 |
| ·成骨细胞培养特性研究 | 第73-74页 |
| ·脂质体转染成骨细胞的条件研究 | 第74-76页 |
| ·PEI转染成骨细胞的条件优化 | 第76-77页 |
| ·两种转染试剂的比较 | 第77-79页 |
| ·G418粗筛阳性克隆的浓度确定 | 第79页 |
| ·重组质粒在成骨细胞中代谢时间 | 第79-80页 |
| ·bFGF的表达情况 | 第80-84页 |
| ·bFGF基因转染对成骨细胞生物学性质的影响 | 第84-89页 |
| 本章小结 | 第89-91页 |
| 第四章 bFGF基因转染成骨细胞体内成骨的初步研究 | 第91-100页 |
| ·引言 | 第91页 |
| ·实验材料 | 第91-92页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第91页 |
| ·实验动物 | 第91页 |
| ·细胞支架材料 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91页 |
| ·培养液和溶液 | 第91页 |
| ·主要仪器和设备 | 第91-92页 |
| ·技术路线 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-94页 |
| ·动物实验分组 | 第92页 |
| ·骨膜成骨细胞分离培养 | 第92页 |
| ·重组质粒转染方法 | 第92页 |
| ·成骨细胞接种于 PHA的方法 | 第92-93页 |
| ·成骨细胞在载体上生长情况观察 | 第93页 |
| ·X线观察成骨情况 | 第93页 |
| ·组织切片 | 第93页 |
| ·HE染色 | 第93-94页 |
| ·结果与讨论 | 第94-99页 |
| ·bFGF基因转染成骨细胞在 PHA载体周围的生长情况 | 第94-95页 |
| ·扫描电镜观察细胞在载体表面的生长情况 | 第95-97页 |
| ·PHA载体中成骨细胞表达bFGF的情况 | 第97页 |
| ·成骨细胞与载体的复合物在体内的成骨研究 | 第97-99页 |
| ·组织 HE染色结果 | 第99页 |
| 本章小结 | 第99-100页 |
| 结论与展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 在读期间发表论文及所受奖励 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
