| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| ·NAC转录因子的研究进展 | 第13页 |
| ·NAC转录因子的结构与分类 | 第13-17页 |
| ·DNA结合区 | 第15页 |
| ·转录调控区 | 第15-16页 |
| ·寡聚化位 | 第16-17页 |
| ·核定位信号区 | 第17页 |
| ·NAC转录因子的作用机制和表达调控 | 第17-18页 |
| ·NAC转录因子的生物学功能 | 第18-20页 |
| ·NAC转录因子在分生组织及花器官发育中的作用 | 第18页 |
| ·NAC转录因子参与调控次生壁增厚 | 第18-19页 |
| ·NAC转录因子在应答非生物胁迫过程中的作用 | 第19页 |
| ·NAC转录因子与次生代谢产物 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| ·本研究技术路线 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-45页 |
| ·材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株及载体 | 第21-22页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·载体 | 第21-22页 |
| ·生化试剂药品 | 第22页 |
| ·常用培养基的配制 | 第22页 |
| ·方法与步骤 | 第22-45页 |
| ·橡胶树胶乳和不同组织中总RNA的提取 | 第22-25页 |
| ·准备工作 | 第22-23页 |
| ·橡胶树胶乳Total RNA的提取 | 第23页 |
| ·橡胶树叶片、茎和树皮Total RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·RNA电泳检测 | 第24-25页 |
| ·cDNA的合成 | 第25页 |
| ·5'RACE、3'RACE分别扩增HbNAC1/2/3的5’端和3’端 | 第25-31页 |
| ·HbNAC1/2/3 5’端的PCR扩增 | 第26页 |
| ·HbNAC1/2/3 3’端的PCR扩增 | 第26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| ·PCR目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第27-31页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·菌液PCR重组子的鉴定 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组子菌种的保存 | 第31页 |
| ·HbNAC1/2/3 cDNA全长的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·测序与全长序列拼接 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增 | 第32页 |
| ·PCR产物的回收 | 第32页 |
| ·PCR目的片段的克隆及重组子的筛选 | 第32页 |
| ·HbNAC1/3启动子区域的扩增 | 第32-36页 |
| ·橡胶叶片基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·叶片基因组DNA酶切 | 第34页 |
| ·酶切基因组DNA的纯化 | 第34页 |
| ·基因组DNA与Genome Walker接头的连接 | 第34-35页 |
| ·第一轮PCR扩增 | 第35页 |
| ·第二轮PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·PCR产物的回收 | 第36页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第36页 |
| ·HbNAC1/2/3的RT-PCR表达分析 | 第36-37页 |
| ·材料的处理 | 第36页 |
| ·RNA的提取 | 第36页 |
| ·cDNA的合成 | 第36页 |
| ·18SrRNA基因作内参 | 第36-37页 |
| ·HbNAC1/2/3基因RT-PCR分析 | 第37页 |
| ·HbNAC1/2/3基因的原核表达 | 第37-40页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第37-39页 |
| ·HbNAC1/2/3基因的酶切 | 第37-38页 |
| ·原核表达载体pET-30a(+)的酶切 | 第38页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第38-39页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第39页 |
| ·工程菌的表达 | 第39页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| ·纯化重组蛋白 | 第40-41页 |
| ·根癌农杆菌介导HbNAC1基因转化烟草 | 第41-45页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第41-43页 |
| ·HbNAC1基因的酶切 | 第42页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304的酶切 | 第42页 |
| ·目的基因片段与表达载体的连接 | 第42-43页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第43页 |
| ·农杆菌电击感受态细胞制备 | 第43页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第43页 |
| ·农杆菌感受态细胞的电击转化 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆菌株的鉴定 | 第44页 |
| ·工程菌的准备 | 第44页 |
| ·农杆菌浸染 | 第44页 |
| ·转基因植株的移栽 | 第44页 |
| ·共转化植株的检测 | 第44-45页 |
| ·烟草基因组DNA的提取 | 第45页 |
| ·共转化植株的PCR检测 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-64页 |
| ·RNA的提取 | 第45页 |
| ·HbNAC1/2/3基因的克隆 | 第45-49页 |
| ·5'RACE扩增HbNAC1/2/3的5’端 | 第45-46页 |
| ·3'RACE扩增HbNAC1/2/3的3’端 | 第46-47页 |
| ·HbNAC1/2/3全长基因的克隆 | 第47-49页 |
| ·HbNAC1/3基因启动子区域的扩增 | 第49-54页 |
| ·构建Genome Walker文库与Genome WalkerDNA步移 | 第49-51页 |
| ·HbNACl基因5’端调控区的序列分析 | 第51-52页 |
| ·HbNAC3基因5’端调控区的序列分析 | 第52-54页 |
| ·HbNAC1/2/3的生物信息学分析 | 第54-58页 |
| ·HbNAC1/2/3氨基酸序列特征分析 | 第54-57页 |
| ·HbNAC1/2/3的系统发育树分析 | 第57-58页 |
| ·HbNAC1/2/3在不同组织和胶乳中的表达分析 | 第58-59页 |
| ·乙烯利刺激对胶乳中HbNAC1/2/3表达的影响 | 第59-60页 |
| ·HbNAC1/2/3的原核表达 | 第60-61页 |
| ·HbNAC1/2/3原核载体的构建 | 第60页 |
| ·p-ET-30a- HbNAC1/2/3融合蛋白的诱导表达分析及HbNAC1纯化 | 第60-61页 |
| ·根癌农杆菌介导的HbNAC1转化烟草 | 第61-64页 |
| ·构建植物表达载体 | 第61-62页 |
| ·pCAMBIA1304-HbNAC1转化至烟草 | 第62-63页 |
| ·转基因阳性植株的鉴定 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| ·关于HbNAC1/2/3转录因子的结构与功能 | 第64页 |
| ·关于NAC转录因子组织表达和诱导表达特异性的分析 | 第64-65页 |
| ·关于HbNAC1/3基因上游调控区的分析 | 第65页 |
| ·下一步的工作 | 第65-66页 |
| 5 结果与结论 | 第66-69页 |
| ·结果 | 第66-68页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录(各段序列) | 第74-77页 |
| 缩略词表 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
