| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 参考文献 | 第14-18页 |
| 第一章 基于 miR-199 调控靶向肝癌细胞的溶瘤腺病毒的构建与制备 | 第18-48页 |
| 一、 材料与方法 | 第19-32页 |
| (一) 实验载体、试剂及细胞株 | 第19-20页 |
| (二) 主要的实验仪器与设备 | 第20页 |
| (三) 主要试剂的配置及实验方法 | 第20-23页 |
| (四) 实验所需的主要引物 | 第23页 |
| (五) microRNA 调控靶点的确定及靶序列调控作用的探索 | 第23-26页 |
| (六) 载体构建步骤及方法 | 第26-28页 |
| (七) 溶瘤腺病毒的重组鉴定、扩增及纯化 | 第28-32页 |
| 二、 结果 | 第32-43页 |
| (一) qRT-PCR 检测细胞中 miR-199a/b-3p 表达量 | 第32页 |
| (二) 双荧光素酶报告基因检测 miR-199a/b-3p 靶序列抑制报告基因的表达情况 | 第32-34页 |
| (三) 腺病毒穿梭载体 pXC1-miR-199T 的构建 | 第34-35页 |
| (四) 腺病毒穿梭载体 pXC1-miR-199MT 的构建 | 第35-37页 |
| (五) 溶瘤腺病毒 WAd5/35、SG7035199MT、SG7035199T的重组及鉴定 | 第37-42页 |
| 1、溶瘤腺病毒 WAd5/35 的 PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| 2、溶瘤腺病毒 SG7035199MT的 PCR 鉴定 | 第38-40页 |
| 3、溶瘤腺病毒 SG7035199T的 PCR 鉴定 | 第40-42页 |
| (六) 溶瘤腺病毒 WAd5/35、SG7035199MT、SG7035199T的大量扩增及滴度测定 | 第42-43页 |
| 三、 讨论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 第二章 基于 miR-199 调控靶向肝癌细胞的溶瘤腺病毒的体外实验 | 第48-71页 |
| 一、 材料与方法 | 第48-58页 |
| (一) 实验材料 | 第48-53页 |
| 1、实验引物 | 第48页 |
| 2、实验细胞株 | 第48页 |
| 3、实验腺病毒 | 第48-49页 |
| 4、实验试剂 | 第49页 |
| 5、实验仪器设备 | 第49-50页 |
| 6、实验溶液的配制 | 第50-53页 |
| (二) 实验方法 | 第53-58页 |
| 1、细胞培养 | 第53页 |
| 2、蛋白免疫印迹分析 | 第53-54页 |
| 3、 qRT-PCR 检测感染病毒后的细胞 E1A 基因表达量 | 第54-55页 |
| 4、病毒增殖实验 | 第55-56页 |
| 5、荧光显微镜下观察溶瘤腺病毒的增殖情况 | 第56-57页 |
| 6、细胞活力检测 | 第57-58页 |
| 二、 结果 | 第58-67页 |
| (一) 蛋白免疫印迹分析 | 第58-59页 |
| (二) qRT-PCR 检测感染病毒后的细胞 E1A 蛋白表达量 | 第59-60页 |
| (三) 病毒增殖实验 | 第60-62页 |
| (四) 荧光显微镜下观察溶瘤腺病毒的增殖情况 | 第62-64页 |
| (五) MTT 实验检测溶瘤腺病毒对细胞杀伤力 | 第64-67页 |
| 三、 讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 第三章 基于 microRNA-199 调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺病毒治疗肝癌的体内实验研究 | 第71-80页 |
| 一、 材料与方法 | 第71-75页 |
| (一) 实验材料 | 第71-72页 |
| 1、实验试剂及腺病毒 | 第71页 |
| 2、实验仪器设备 | 第71页 |
| 3、实验动物 | 第71-72页 |
| (二) 实验方法 | 第72-75页 |
| 1、 BALB/c 裸鼠肝癌及卵巢癌移植瘤模型的建立 | 第72页 |
| 2、疗效观察 | 第72-73页 |
| 3、组织标本取材 | 第73页 |
| 4、常规病理检查 | 第73页 |
| 5、免疫组化染色检测 Hexon 抗原 | 第73-74页 |
| 6、统计分析 | 第74-75页 |
| 二、 结果 | 第75-79页 |
| (一) BALB/c 裸鼠肝癌及卵巢癌移植瘤模型的建立 | 第75页 |
| (二) 肿瘤体积监测 | 第75-77页 |
| (三) 肿瘤 HE 常规染色和腺病毒外壳蛋白六邻体（Hexon）表达 | 第77-79页 |
| 三、 讨论 | 第79-80页 |
| 总结 | 第80-82页 |
| 附录 | 第82-88页 |
| 文献综述 | 第88-101页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
