| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 研究的目的意义与技术路线 | 第13-15页 |
| 试验研究的技术路线 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-30页 |
| 前言 | 第15页 |
| 1.病原学 | 第15-21页 |
| ·PCV2的发现 | 第15-16页 |
| ·PCV2的分类地位 | 第16页 |
| ·PCV2的形态学、理化及培养特性 | 第16-17页 |
| ·PCV2的分子生物学特征 | 第17页 |
| ·编码的蛋白 | 第17-19页 |
| ·Rep蛋白 | 第17-18页 |
| ·Cap蛋白 | 第18页 |
| ·ORF3蛋白 | 第18-19页 |
| ·其他ORFs编码蛋白 | 第19页 |
| ·PCV2的培养特性 | 第19页 |
| ·PCV2的复制 | 第19-20页 |
| ·PCV2毒株的遗传进化 | 第20-21页 |
| 2.流行病学 | 第21-23页 |
| ·易感动物 | 第21-22页 |
| ·传播方式 | 第22页 |
| ·流行情况 | 第22-23页 |
| 3.PCV2的致病机理 | 第23-25页 |
| ·感染PCV2后猪体内的相关变化 | 第24页 |
| ·各种因素对PCV2感染的影响 | 第24-25页 |
| ·其他病原对疾病发展的促进和诱导 | 第24页 |
| ·免疫刺激的作用 | 第24-25页 |
| 4.与PCV2相关的疾病 | 第25-26页 |
| ·断奶后仔猪多系统衰竭综合症 | 第25页 |
| ·猪肾病与皮炎综合症 | 第25-26页 |
| ·母猪繁殖障碍 | 第26页 |
| 5. PCVD相关疫苗 | 第26-30页 |
| ·PCV2疫苗应用现状 | 第26-27页 |
| ·全病毒灭活苗 | 第27-28页 |
| ·亚单位疫苗 | 第28页 |
| ·嵌合病毒灭活苗 | 第28-29页 |
| ·免疫接种的方法 | 第29-30页 |
| 第二部分 研究内容 | 第30-61页 |
| 第一章 猪圆环病毒2感染模型的建立 | 第30-45页 |
| 摘要 | 第30页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·毒株 | 第30页 |
| ·实验猪 | 第30页 |
| ·试剂与耗材 | 第30-31页 |
| ·主要仪器及设备 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-38页 |
| ·病毒的大量培养和浓缩 | 第31-32页 |
| ·病毒的培养 | 第31-32页 |
| ·细胞培养 | 第31页 |
| ·接毒 | 第31页 |
| ·收毒 | 第31-32页 |
| ·病毒的浓缩 | 第32页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第32页 |
| ·动物的分组设计与实验感染 | 第32-33页 |
| ·临床指标观察 | 第33页 |
| ·采食量 | 第33页 |
| ·体温 | 第33页 |
| ·体重 | 第33页 |
| ·临床样本收集 | 第33页 |
| ·鼻拭子和肛拭子 | 第33页 |
| ·血液样本采集 | 第33页 |
| ·剖检与病料采集 | 第33-34页 |
| ·测定PCV2抗体的IFA效价 | 第34页 |
| ·病毒板的制作 | 第34页 |
| ·IFA效价的测定 | 第34页 |
| ·测定PCV2抗体的ELISA效价 | 第34页 |
| ·组织病理切片 | 第34页 |
| ·病毒核酸的检测 | 第34-37页 |
| ·病料中DNA的抽提 | 第34-35页 |
| ·病毒全基因组的克隆 | 第35-37页 |
| ·引物的设计 | 第35页 |
| ·通过PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·PCR产物纯化 | 第36页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·转化 | 第36页 |
| ·PCR质粒抽提 | 第36-37页 |
| ·PCR验证 | 第37页 |
| ·病毒的再分离 | 第37页 |
| ·PCV2核酸的荧光定量PCR(qPCR) | 第37-38页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计与合成 | 第37页 |
| ·荧光PCR的反应体系与程序 | 第37-38页 |
| ·数据处理 | 第38页 |
| 3. 结果 | 第38-44页 |
| ·病毒效价的测定 | 第38页 |
| ·感染猪采食量变化 | 第38页 |
| ·体温动态变化 | 第38-39页 |
| ·体重增长趋势 | 第39-40页 |
| ·临床剖检病变 | 第40页 |
| ·组织病理变化 | 第40-41页 |
| ·感染猪病毒全基因测序与病毒的再分离 | 第41-42页 |
| ·病毒在各个组织的分布及其载量 | 第42页 |
| ·血清中病毒核酸的定量 | 第42-43页 |
| ·攻毒猪的排毒 | 第43-44页 |
| 4.讨论 | 第44-45页 |
| 第二章 PCV2免疫原性研究 | 第45-61页 |
| 摘要 | 第45-46页 |
| 1 材料和方法 | 第46-50页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·病毒和佐剂 | 第46页 |
| ·实验猪 | 第46页 |
| ·试验动物背景 | 第46-47页 |
| ·试剂与耗材 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-50页 |
| ·病毒抗原制备 | 第47页 |
| ·病毒TCID_(50)的测定 | 第47页 |
| ·抗原的浓缩 | 第47页 |
| ·抗原的灭活 | 第47-48页 |
| ·抗原灭活的安全性检测 | 第48页 |
| ·疫苗的制备 | 第48页 |
| ·动物免疫实验设计与强毒攻击 | 第48-49页 |
| ·强毒攻击 | 第49页 |
| ·临床指标观察 | 第49页 |
| ·采食量 | 第49页 |
| ·体温 | 第49页 |
| ·体重 | 第49页 |
| ·临床样本收集 | 第49页 |
| ·鼻拭子和肛拭子 | 第49页 |
| ·血液样本采集 | 第49页 |
| ·剖检与病料采集 | 第49页 |
| ·IFA效价测定 | 第49页 |
| ·ELISA抗体效价测定 | 第49页 |
| ·组织病理切片 | 第49页 |
| ·组织和血清中PCV2核酸的荧光定量PCR(qPCR) | 第49-50页 |
| ·排毒情况测定 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-60页 |
| ·病毒抗原灭活安全性检测 | 第50页 |
| ·采食量 | 第50页 |
| ·体温动态变化 | 第50-51页 |
| ·体重增长趋势 | 第51-52页 |
| ·抗PCV2特异性抗体的检测 | 第52-53页 |
| ·IFA效价的测定 | 第52-53页 |
| ·ELISA抗体 | 第53页 |
| ·中和抗体效价 | 第53页 |
| ·病毒血症 | 第53-54页 |
| ·攻毒猪的排毒 | 第54-55页 |
| ·临床剖检病变 | 第55-57页 |
| ·组织病理变化 | 第57-58页 |
| ·病毒在各个组织的分布及其载量 | 第58-59页 |
| ·病毒的再分离 | 第59-60页 |
| 3. 讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附录一 常用缓冲液及培养基配方 | 第65-73页 |
| 附录二 攻读硕士期间研究成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |