| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| ·猪瘟及其危害 | 第11-12页 |
| ·猪瘟的分布与流行 | 第12页 |
| ·猪瘟病毒 | 第12-17页 |
| ·猪瘟病毒的形态特征 | 第12-13页 |
| ·猪瘟病毒的抗原性与变异性 | 第13-14页 |
| ·猪瘟病毒分子生物学研究进展 | 第14-17页 |
| ·猪瘟基因组的基本结构 | 第14页 |
| ·5'和3'-NTR的结构和功能 | 第14-15页 |
| ·开放阅读框(Open Reading Frame，ORF) | 第15页 |
| ·结构蛋白基因 | 第15-16页 |
| ·非结构蛋白基因 | 第16-17页 |
| ·猪瘟发病机理 | 第17页 |
| ·猪瘟的实验室诊断方法 | 第17-19页 |
| ·病毒的培养 | 第17页 |
| ·血清学诊断研究进展 | 第17-18页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第18-19页 |
| ·单克隆抗体在猪瘟病毒研究中的应用 | 第19-21页 |
| ·单克隆抗体的研究进展 | 第19页 |
| ·单克隆抗体在CSFV诊断及分子生物学研究中的应用 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·材料与方法 | 第21-33页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·细胞、病毒与动物 | 第21页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第21页 |
| ·培养基及主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第22页 |
| ·染色体计数相关试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·腹水纯化用试剂 | 第23页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)相关溶液 | 第23-24页 |
| ·其他试剂的配制 | 第24页 |
| ·抗体提供 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-26页 |
| ·病毒粒子的大量制备与纯化 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·总RNA的制备 | 第25页 |
| ·RT-PCR检测 | 第25页 |
| ·动物免疫 | 第25-26页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第26页 |
| ·阴性血清与阳性血清的制备 | 第26页 |
| ·抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第26页 |
| ·细胞融合 | 第26-29页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第27页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第27页 |
| ·细胞融合 | 第27-28页 |
| ·杂交瘤细胞上清检测 | 第28页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法) | 第28-29页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第29页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第29-31页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第29-30页 |
| ·单克隆抗体的生产、纯化和效价测定 | 第30页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第30页 |
| ·间接免疫荧光法检测单克隆抗体 | 第30-31页 |
| ·单抗特异性鉴定 | 第31页 |
| ·酶标单克隆抗体的制备 | 第31页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第31-33页 |
| ·双抗体夹心ELISA的步骤 | 第31-32页 |
| ·单抗包被浓度的确定 | 第32页 |
| ·标记二抗浓度的确定 | 第32页 |
| ·特异性实验 | 第32页 |
| ·敏感性实验 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-42页 |
| ·病毒的纯化 | 第33-34页 |
| ·病毒蛋白含量的测量 | 第33页 |
| ·纯化的病毒的检测 | 第33-34页 |
| ·细胞融合 | 第34-35页 |
| ·八次融合后结果分析 | 第34页 |
| ·细胞融合后结果观察 | 第34-35页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第35-37页 |
| ·间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞 | 第35-36页 |
| ·抗原最佳包被浓度的确定 | 第35-36页 |
| ·单抗效价的检测 | 第36页 |
| ·单抗的特异性测定结果 | 第36-37页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第37页 |
| ·间接免疫荧光结果 | 第37-38页 |
| ·腹水纯化结果 | 第38页 |
| ·单克隆抗体的稳定性分析 | 第38-39页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第39页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第39-42页 |
| ·2D1单抗最佳包被浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·3B9单克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第40页 |
| ·敏感性测定结果 | 第40页 |
| ·特异性检测的结果 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| ·抗原的制备 | 第42页 |
| ·小鼠的免疫 | 第42页 |
| ·细胞融合 | 第42-43页 |
| ·单抗的筛选 | 第43页 |
| ·克隆 | 第43-44页 |
| ·失败原因和影响因素 | 第44页 |
| ·双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第44-45页 |
| 5 小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
