| 缩略词 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 引言 | 第13-30页 |
| 1 鸭疫里默氏杆菌概述 | 第13-14页 |
| 2 禽大肠杆菌概述 | 第14-15页 |
| 3 原生质体融合技术的研究进展 | 第15-30页 |
| ·原生质体制备和再生过程中的影响因素 | 第16-21页 |
| ·原生质体融合的方法 | 第21-26页 |
| ·原生质体融合子的筛选方法 | 第26-29页 |
| ·前景及展望 | 第29-30页 |
| 试验一 鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌融合亲本菌株的筛选 | 第30-41页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-33页 |
| ·细菌的分离、培养与计数 | 第31-32页 |
| ·纸片扩散法药敏试验 | 第32页 |
| ·最低体外抑菌浓度(MIC)的测定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-39页 |
| ·细菌药敏试验的最适OD600 值 | 第33-34页 |
| ·药敏试验结果 | 第34-36页 |
| ·MIC 的测定结果 | 第36-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 试验二 鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌原生质体融合试验 | 第41-56页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| ·供试菌株 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·主要溶液 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-44页 |
| ·两亲本菌株生长曲线的测定 | 第42-43页 |
| ·两亲本菌株原生质体的制备 | 第43页 |
| ·原生质体的再生 | 第43-44页 |
| ·原生质体制备率和再生率的测定和计算 | 第44页 |
| ·原生质体融合及再生 | 第44页 |
| ·融合菌株的检出及鉴定 | 第44页 |
| ·融合菌株的稳定性试验 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-52页 |
| ·两亲本株菌龄的选择 | 第44-45页 |
| ·Lysozyme-EDTA 工作浓度、作用时间的优化 | 第45-47页 |
| ·原生质体的制备方式的选择 | 第47-48页 |
| ·再生培养基中蔗糖浓度和琼脂浓度的选择 | 第48-49页 |
| ·高渗悬浮缓冲液的选择 | 第49页 |
| ·融合菌株的再生及检出 | 第49页 |
| ·融合菌株的表型鉴定结果 | 第49-52页 |
| 4 讨论 | 第52-56页 |
| 试验三 鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌融合菌株双重PCR 检测方法的建立 | 第56-67页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| ·供试菌株 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要培养基 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌转化用溶液 | 第57页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第57页 |
| ·提质粒和基因组 DNA 所用溶液 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-63页 |
| ·引物设计与合成 | 第58-59页 |
| ·DNA 模板的制备 | 第59页 |
| ·融合菌株外膜蛋白的PCR 扩增 | 第59-60页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第60-61页 |
| ·纯化的PCR 产物与pMD18-T 载体连接 | 第61页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第61页 |
| ·连接产物的转化 | 第61-62页 |
| ·阳性转化子的筛选及质粒DNA 的提取 | 第62页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第62-63页 |
| ·PCR 产物的测序 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-66页 |
| ·退火温度的优化结果 | 第63-64页 |
| ·融合菌株的双重PCR 扩增结果 | 第64-65页 |
| ·双重PCR 产物的纯化、克隆 | 第65页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第65页 |
| ·双重PCR 产物的序列测定及比对结果 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介及攻读硕士期间发表论文情况 | 第77页 |
