| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-20页 |
| 第一章 酮古龙酸菌糖酸转化突变株的筛选 | 第20-34页 |
| ·材料 | 第20-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第20-21页 |
| ·培养基和生长条件 | 第21页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·pUT-Tn5-ori-KM2载体的构建 | 第23-25页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第23页 |
| ·ori片段扩增 | 第23-24页 |
| ·酶切反应体系 | 第24页 |
| ·载体酶切后进行去磷酸化处理 | 第24页 |
| ·连接反应体系 | 第24页 |
| ·一步法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第24-25页 |
| ·pUT-Tn5-ori-KM2载体鉴定 | 第25页 |
| ·接合转座诱变实验 | 第25页 |
| ·突变菌株的筛选 | 第25-26页 |
| ·薄层板的制作 | 第25-26页 |
| ·突变株薄层层析分析 | 第26页 |
| ·细菌基因组DNA的小量制备 | 第26页 |
| ·蛋白电泳 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-33页 |
| ·pUT-Tn5-ori-KM2载体构建 | 第27-29页 |
| ·pUT-Tn5-ori-KM2质粒的酶切鉴定及复制子ori功能验证 | 第29-30页 |
| ·供受体菌抗生素浓度耐受考察 | 第30页 |
| ·pUT-Tn5-ori-KM2质粒转座功能验证 | 第30页 |
| ·突变菌株的筛选 | 第30-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第二章 葡糖杆菌醇糖转化突变株的筛选 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要溶液 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第35页 |
| ·菌株抗性考察 | 第35页 |
| ·转座载体pUT-Tn5-ori-KM2的接合反应 | 第35页 |
| ·薄层板的制作和薄层层析分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-37页 |
| ·供受体菌抗性耐受考察 | 第35-36页 |
| ·接合转移转座实验 | 第36页 |
| ·突变株的筛选 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 酮古龙酸菌全基因组序列测定 | 第38-50页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·菌株 | 第39页 |
| ·培养基和生长条件 | 第39页 |
| ·主要溶液 | 第39页 |
| ·引物 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·薄层层析(TLC)分析小菌 | 第40页 |
| ·16S rDNA的扩增 | 第40-41页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第41页 |
| ·SOLEXA测序 | 第41-42页 |
| ·基因确定及功能注释 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-49页 |
| ·糖酸代谢考察 | 第43页 |
| ·SCB329基因组提取 | 第43-44页 |
| ·16S rDNA鉴定 | 第44页 |
| ·SCB329基因组基本概况 | 第44-47页 |
| ·功能注释 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 酮古龙酸菌山梨糖脱氢酶基因分离 | 第50-63页 |
| ·材料 | 第50-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·引物设计 | 第50-51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51-52页 |
| ·溶液 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·基因组提取及常规分子生物学操作 | 第52-53页 |
| ·PCR反应及测序克隆构建 | 第53页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及脱氢酶活性检测 | 第53页 |
| ·DCIP活性检测 | 第53-54页 |
| ·体外转化反应 | 第54页 |
| ·山梨糖和2-KGA的薄层层析分析 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-62页 |
| ·目的基因片段的PCR扩增 | 第54-56页 |
| ·表达载体的构建 | 第56页 |
| ·含扩增片段重组质粒的构建 | 第56-58页 |
| ·山梨糖脱氢酶活性鉴定 | 第58页 |
| ·DCIP酶活定性检测 | 第58-59页 |
| ·AADH的底物范围考察 | 第59页 |
| ·AADH的体外转化反应 | 第59-60页 |
| ·AADH的醌酶-糖代谢效应 | 第60-61页 |
| ·带自身启动子的读框考察 | 第61页 |
| ·脱氢酶编码框的系统发育 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 总结 | 第63-64页 |
| 英文缩略词表 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 发表文章 | 第68页 |
| 获得奖励 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |